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目的：黑素瘤是人类最具侵袭性的肿瘤之一。人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因是与黑素瘤相关的癌基因，其表达调控机制仍不明确。hTERT基因启动子区异常甲基化已被报道与多种肿瘤发生发展相关。本研究，通过检测黑素瘤和色素痣hTERT基因启动子区不同CpG岛(CpG Island,CGIs)甲基化水平及hTERT mRNA相对表达水平，分析不同CGIs甲基化水平与hTERT mRNA相对表达水平、临床病理特征的相关性，探讨hTERT基因启动子区不同CGIs甲基化在黑素瘤诊断、预后评估中的潜在价值。
方法：应用生物信息学软件分析hTERT基因启动子区，选取CGIs；取2014-2016年间某院皮肤科收集的14例黑素瘤(8例黏膜型和6例肢端型)和14例色素痣（肢端痣）对照者新鲜冰冻组织，收集整理患者临床病理特征资料；采用亚硫酸氢盐修饰后PCR(Bisulfite Genomic Sequencing PCR,BSP)联合TA克隆检测hTERT基因启动子区CGIs甲基化水平；采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测hTERT mRNA相对表达水平；分析hTERT基因启动子区不同CGIs与黑素瘤hTERT mRNA相对表达水平、临床病理特征的相关性。
结果：最终选择3个CGIs(CGIs-1(-1392至-1098bp),CGIs-2(-945至-669bp)和CGIs-3(-445至-48bp))。BSP联合TA克隆分析hTERT基因启动子区3个CGIs甲基化水平显示，黑素瘤组3个CGIs甲基化水平均高于色素痣组(CGIs-1：69.3±18.7%vs46.8±20.4%，CGIs-2:73.8±14.7%vs55.6±16.0%，CGIs-3：5.8±2.2%vs2.2±1.3%)，差异均具有统计学意义(P<0.05)。qRT-PCR检测hTERT mRNA相对表达水平显示，黑素瘤组hTERT mRNA相对表达水平高于色素痣组(50.39±9.16vs26.10±7.25)，差异具有统计学意义(t=7.778，P<0.05)。线性回归分析表明，黑素瘤组CGIs-2甲基化水平与hTERT mRNA相对表达水平呈正相关(R2=0.490,F=13.478，P=0.003)，黑素瘤组CGIs-1、CGIs-3甲基化水平与hTERT mRNA相对表达水平不相关(CGIs-1：R2=0.083，F=0.001，P=0.972；CGIs-3：R2=0.047，F=0.411，P=0.533)。结合临床病理特征分析，有淋巴结转移的黑素瘤CGIs-2甲基化水平高于无淋巴结转移的患者，并且甲基化水平随着病理分期的进展而增高；黑素瘤组CGIs-1、CGIs-3甲基化水平与临床病理特征不相关。
结论：黑素瘤与色素痣hTERT基因启动子区存在差异甲基化，黑素瘤hTERT mRNA相对表达水平高于色素痣；黑素瘤hTERT基因启动子区为部分高甲基化；CGIs-2(-945至-669bp)为高甲基化区域，甲基化水平与hTERT mRNA相对表达水平相关，因此，CGIs-2甲基化可作为潜在的生物标志物来区分黑素瘤与色素痣，并且CGIs-2甲基化水平与淋巴结转移、病理分期相关，提示CGIs-2甲基化或可用于判断黑素瘤病情进展及预后；核心启动子区及其周围的CGIs-3(-445至-48bp)为低甲基化区域，并且与hTERT mRNA相对表达水平及临床病理特征不相关。
方法：应用生物信息学软件分析hTERT基因启动子区，选取CGIs；取2014-2016年间某院皮肤科收集的14例黑素瘤(8例黏膜型和6例肢端型)和14例色素痣（肢端痣）对照者新鲜冰冻组织，收集整理患者临床病理特征资料；采用亚硫酸氢盐修饰后PCR(Bisulfite Genomic Sequencing PCR,BSP)联合TA克隆检测hTERT基因启动子区CGIs甲基化水平；采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测hTERT mRNA相对表达水平；分析hTERT基因启动子区不同CGIs与黑素瘤hTERT mRNA相对表达水平、临床病理特征的相关性。
结果：最终选择3个CGIs(CGIs-1(-1392至-1098bp),CGIs-2(-945至-669bp)和CGIs-3(-445至-48bp))。BSP联合TA克隆分析hTERT基因启动子区3个CGIs甲基化水平显示，黑素瘤组3个CGIs甲基化水平均高于色素痣组(CGIs-1：69.3±18.7%vs46.8±20.4%，CGIs-2:73.8±14.7%vs55.6±16.0%，CGIs-3：5.8±2.2%vs2.2±1.3%)，差异均具有统计学意义(P<0.05)。qRT-PCR检测hTERT mRNA相对表达水平显示，黑素瘤组hTERT mRNA相对表达水平高于色素痣组(50.39±9.16vs26.10±7.25)，差异具有统计学意义(t=7.778，P<0.05)。线性回归分析表明，黑素瘤组CGIs-2甲基化水平与hTERT mRNA相对表达水平呈正相关(R2=0.490,F=13.478，P=0.003)，黑素瘤组CGIs-1、CGIs-3甲基化水平与hTERT mRNA相对表达水平不相关(CGIs-1：R2=0.083，F=0.001，P=0.972；CGIs-3：R2=0.047，F=0.411，P=0.533)。结合临床病理特征分析，有淋巴结转移的黑素瘤CGIs-2甲基化水平高于无淋巴结转移的患者，并且甲基化水平随着病理分期的进展而增高；黑素瘤组CGIs-1、CGIs-3甲基化水平与临床病理特征不相关。
结论：黑素瘤与色素痣hTERT基因启动子区存在差异甲基化，黑素瘤hTERT mRNA相对表达水平高于色素痣；黑素瘤hTERT基因启动子区为部分高甲基化；CGIs-2(-945至-669bp)为高甲基化区域，甲基化水平与hTERT mRNA相对表达水平相关，因此，CGIs-2甲基化可作为潜在的生物标志物来区分黑素瘤与色素痣，并且CGIs-2甲基化水平与淋巴结转移、病理分期相关，提示CGIs-2甲基化或可用于判断黑素瘤病情进展及预后；核心启动子区及其周围的CGIs-3(-445至-48bp)为低甲基化区域，并且与hTERT mRNA相对表达水平及临床病理特征不相关。