野生种往往具有常规栽培种少有的优良特性,它们在增加遗传多样性、品种改良等方面都有重要的价值。然而,柑橘的多胚性、童期长、雌/雄性器官败育等特性给野生种的有效利用增加了难度。体细胞杂交技术能有效克服这些问题,实现远缘杂交,使亲本的核或胞质DNA发生重组,转移近缘野生种的有利性状,为柑橘的遗传改良提供了有效的途径。本研究旨在利用体细胞杂交技术,将柑橘的野生品种与枳橙(Poncitrus trifoliata Raf.×Citrus sinensis Osb.)、早花柠檬(C.limon)进行原生质体对称融合,实现野生种有利性状的转移,创造新型砧木。主要结果如下:1.调控野生橘愈伤组织的生长状态,建立了利于原生质体分离的胚性愈伤组织悬浮系。经愈伤组织、叶肉原生质体的分离、纯化、融合及培养再生,获得了两个组合,即崇义野橘(C.reticulata)+枳橙、崇义野橘+早花柠檬的再生胚状体和植株。其中,崇义野橘+枳橙再生胚状体的时间较长,但很快诱导生芽,崇义野橘+早花柠檬的胚状体生长迅速,但难以诱导生芽。说明在相同培养条件下,不同组合间融合产物的再生存在较大差异。2.组合崇义野橘+枳橙再生的4棵最大的芽均为二倍体,SSR分析表明其核DNA除了具有叶肉亲本与愈伤亲本共有的特征带外,还出现了两条两亲本都没有的新带。随机挑选崇义野橘+早花柠檬再生产物中的四个胚状体,经流式细胞仪测定,其中两个是四倍体,两个是二倍体,SSR分析证实两个四倍体同时具有双亲的核DNA特征带,是异源四倍体,且其中一个出现了新带,可能发生了遗传重组,两个二倍体与悬浮愈伤具有相同的特征带,推测其为悬浮愈伤原生质体直接再生而来。综上所述,利用体细胞杂交技术,最终获得了一批体细胞杂种。这些可能带有野生橘有益性状的体细胞杂种,特别是异源四倍体,将可能成为新型砧木。