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目的观察硫酸镍(NiSO4)致体外培养的大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌的变化,从睾酮合成酶和氧化应激角度探讨其可能机制。方法采用胶原酶消化、Percoll梯度密度离心和差速贴壁法体外分离和纯化大鼠睾丸间质细胞,并用3p-HSD染色法对细胞纯度进行鉴定。体外培养的睾丸间质细胞分别用0、250、500和1000μmol/L NiSO4及1IU/m1人绒毛膜促性腺激素(hCG)处理6、12和24h。用酶联免疫吸附法检测培养上清液中睾酮(T)浓度。实时荧光定量PCR技术检测睾丸间质细胞类固醇合成快速调节蛋白(StAR)、细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)、3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)和类固醇17α-羟化酶(P450c17) mRNA的表达水平。流式细胞仪检测睾丸间质细胞内活性氧(ROS)水平,分光光度法检测细胞抑制羟自由基能力(Anti-OH),酶联免疫吸附法检测细胞内8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的含量。结果(1)3β-HSD法鉴定结果显示,体外纯化的大鼠睾丸间质细胞胞浆呈深蓝色,其纯度可达90%以上。(2)睾酮测定结果显示：相同处理浓度,与0h组比较,hCG和NiSO4Oμmol/L同时处理睾丸间质细胞24h后培养上清液中T浓度明显升高(P<0.01),hCG和NiSO41000μmol/L同时处理间质细胞24h后培养上清液中T浓度明显降低(P<0.01)。相同处理时间,与对照组比较,hCG和NiSO4各浓度同时处理间质细胞24h后,NiSO4各浓度组培养上清液中T浓度明显降低(P<0.01)。(3)实时荧光定量PCR检测结果显示：hCG和NiSO4同时处理睾丸间质细胞24h后,与0h组比较,NiSO40μmol/L处理组间质细胞StAR mRNA表达量明显升高(P<0.01), NiSO4250μmol/L处理组间质细胞P450scc、3p-HSD和P450c17mRNA表达量均明显降低(P<0.01),而NiSO4500μmol/L和1000μmol/L处理组间质细胞StAR、P450scc、3β-HSD和P450c17mRNA表达量均明显降低(P<0.01)。hCG和NiSO4同时处理睾丸间质细胞24h后,与对照组比较,NiSO4各浓度组StAR、P450scc、3β-HSD和P450c17mRNA表达量均明显降低(P<0.01)。(4)细胞内ROS含量测定结果显示：相同处理浓度,与0h组比较,NiSO4250μmol/L组处理12h后大鼠睾丸间质细胞ROS水平增高(P <0.05); NiSO4500和1000μmol/L处理睾丸间质细胞6、12和24h后,间质细胞内ROS水平均明显增高(P<0.05)。相同处理时间,与对照组比较,硫酸镍处理6h后,NiSO4500和1000μmol/L处理组细胞内ROS水平明显增加(P<0.05)；硫酸镍处理12h后,NiSO4500和1000μmol/L处理组细胞内ROS水平明显增高(P<0.05)；硫酸镍处理24h后,NiSO4各浓度组均使细胞内ROS水平明显增高(P<0.01)。(5)间质细胞Anti-OH水平测定结果显示：相同处理浓度,与0h组比较,NiSO4250μmol/L处理12h和24h后间质细胞Anti-·OH水平降低(P<0.01); NiSO4500和1000μmol/L分别处理6、12和24h后间质细胞Anti-OH水平均降低(P<0.05)。相同处理时间,与对照组比较,硫酸镍处理6h后,NiSO4500和1000μmol/L组间质细胞Anti-’OH水平降低(P<0.05)；硫酸镍处理12h和24h后,NiSO4各浓度组间质细胞Anti-·OH水平均降低(P<0.01)。(6)8-OHdG测定结果显示：相同处理浓度,与0h组比较,NiSO4500和1000μmol/L分别处理12和24h后细胞内8-OHdG含量均增加(P<0.01)。相同处理时间,与对照组比较,硫酸镍处理12和24h后,NiSO4500和1000μmol/L组细胞内8-OHdG含量均显著增加(P<0.05)。结论硫酸镍诱导的体外培养大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌量降低可能与其引起的间质细胞睾酮合成酶基因表达下调及DNA氧化损伤有关。