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肝癌在我国位居癌症发病率的第四位，位居癌症死亡率的第二位。目前对肝癌还没有有效的治疗方法，主要治疗方法是早期手术切除，唯一被批准用于肝癌治疗的分子靶向药物索拉非尼(sorafenib)平均延长病人寿命3个月。而越来越多的证据表明免疫治疗可能是癌症治疗的有效手段。 肝脏被认为是免疫耐受器官，但是，它相比于其它组织和器官，又具有较高比例的CD8+T细胞和NK细胞，二者又是机体抗肿瘤的主要免疫效应细胞。因此，如何克服肝癌的免疫抑制机制，激活和增强肝脏CD8+T细胞和NK细胞的效应功能，将是肝癌免疫治疗的关键。白介素-15(IL-15)是促进CD8+T细胞和自然杀伤细胞(NK)的扩增和效应功能的主要细胞因子之一，而IL-15与受体IL-15Rα形成融合蛋白hyper IL-15后可以明显增强IL-15的效应功能。 为了研究hyper IL-15对肝癌的治疗作用，我们通过肝门静脉注射鼠源性黑色素瘤细胞系B16-OVA和结直肠癌细胞系CT26的方法建立了实验性小鼠肝转移模型，通过腹腔注射二乙基亚硝胺(DEN)诱导的方法建立了原发性肝癌模型。利用高压注射hyper IL-15表达质粒，在肝脏实质细胞过表达hyperIL-15蛋白，可以在体内，特别是在肝脏内显著增加CD8+T细胞和NK细胞数量，并在体内长期维持大量的CD8+T细胞（超过40天）。高压注射hyper IL-15不但可以有效抑制转移性肝癌，更重要的是对已建立的原发性肝癌也有显著的治疗作用。淋巴细胞体内删除实验证实，hyperIL-15对转移和原发肝癌的治疗主要依赖于CD8+T细胞的作用，而非NK细胞。利用OVA特异性TCR转基因小鼠（OT-1小鼠）淋巴细胞过继转移实验，我们发现hyper IL-15能打破肿瘤微环境导致的肿瘤特异性T细胞免疫耐受，优先激活和扩增肿瘤特异性CD8+T细胞，发挥其抗肿瘤作用。 同时，我们发现肝癌浸润的CD8+T细胞高表达免疫抑制性分子PD-1，提示联合阻断PD-1信号通路可以显著增强hyper IL-15的治疗效果。为此，我们构建了抗PD-1的单链抗体(anti-PD1-ScFv)与hyperIL-15的融合质粒。与hyperIL-15质粒相比，高压注射anti-PD1-ScFv-hyperIL-15融合质粒可以增加体内CD8+T细胞比例，但不增加NK细胞比例，可以明显延长转移肝癌小鼠的生存期，说明anti-PD1-ScFv-hyperIL-15-Flag融合蛋白通过与PD-1结合，对CD8+T细胞有靶向富集作用，可以特异性作用于CD8+T细胞，增强其抗肿瘤作用。 综上所述，高压注射HyperIL-15质粒通过CD8+T细胞依赖的而非NK依赖的方式抑制转移性和原发性肝癌，且主要通过促进肿瘤抗原特异性的CD8+T细胞的扩增和增强其分泌IFN-y和杀伤功能来实现。高压注射抗PD-1的单链抗体(anti-PD1-ScFv)与hyperIL-15的融合质粒anti-PD1-ScFv-hyperIL-15-Flag通过对CD8+T细胞的靶向作用，与hyperIL-15相比更集中的增强CD8+T细胞的效应功能从而更有效的抑制转移性肝癌。相信anti-PD1-ScFv-hyperIL-15融合蛋白能够更好的治疗转移性和原发性肝癌，为临床上治疗肝癌提供新的思路。