论文部分内容阅读
目的：RhD--缺失型是Rh血型系统一种极为罕见的变异体,血清学特征表现为红细胞上RhC／c、E／e抗原的完全缺乏和(或)D抗原的过量表达。目前RhD--缺失型的分子生物学机制尚不明确,国外的研究发现了两种情况：一种是RHCE基因完整但无表达活性,另一种是RHCE基因部分缺失。前者考虑是由于mRNA的转录活性降低所致,后者考虑是外显子部分缺失和基因重组两种机制。国内还没有相关报道。由于同一种血型表型,可以对应多种基因型,而且在不同种族和同一种族的不同群体中,同一种表型所对应的基因型也不尽相同。Rh血型系统的多态性一直是阻碍基因定型技术普及的障碍。目前有关血型基因结构的资料,大多数来源于白人,不符合我国的种族群体特点。中国人群民族多,数量大,遗传杂合性大。本研究通过对两例确证为RhD--个体RH基因结构和表达的深入研究,明确中国部分汉族人群的RhD--缺失型个体可能存在的新的发生机制。这对搞清中华民族的血型基因结构,广泛开展血型基因分型技术是十分必要的,还可能发现新的RH等位基因。方法：(1)从正常人外周血中网织红细胞中提取总RNA逆转录RHD基因；(2)构建RHD基因克隆载体,转染大肠杆菌；(3)地高辛标记PCR法扩增RHcDNA特异性三段探针和Exon1特异性探针,对两例RhD--个体采用HindⅢ和SphⅠ限制性内切酶酶切血液基因组DNA并与特异性探针进行Southern blot,并采用PCR-SSP方法扩增两例RhD--个体RHCE基因多个外显子和内含子；(4)采用RT-PCR方法检测RhD--个体是否有RHCE剪接体转录。结果：(1)获得RHD基因；(2)构建RHD基因克隆成功；(3)Southern blot发现两例RhD一个体RHCE基因均存在exonl,但存在中间段缺失(exon4-exon7缺失),进一步采用PCR-SSP方法特异性扩增RHCE基因外显子及内含子,证实RhD--个体RHCE intro、exon4-7基因片段丢失,但exon3、exon9及3’端基因序列均存在。(4)未检测到两RhD--个体RHCE基因转录产物表达。结论：(1)中国部分汉族人群的RhD--缺失型个体的产生原因是RHCE基因exon4-7缺失,其截短的RHCE基因不表达相关活性产物,这与国外学者对白人、黑人RhD--缺失型个体发生的分子机制研究结果不同。