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目的: 前期研究显示HCMV感染U251细胞后上调细胞hsa-miR-27b表达，通过生物信息学分析显示Egrailed-2(EN2)基因为hsa-miR-27b调控的靶基因之一。本研究的目的是通过实验证实hsa-miR-27b靶向调控EN2，为进一步阐明miRNA表达改变在HCMV感染导致神经系统发育畸形中的作用提供实验基础。 方法: ①采用生物信息学方法分析hsa-miR-27b靶向调控EN2的靶点位置和EN2的生物学功能。 ②构建hsa-miR-27b表达载体LV3-HmiR-27b，将LV3-HmiR-27b表达载体转染HEK-293T细胞，转染后24h和48h，用Real-time RT-PCR检测其成熟体HmiR-27b的表达水平。 ③构建EN2-mRNA-3'UTR正义链和反义链表达载体Psi-EN2-UTR-S和Psi-EN2-UTR-AS。将 LV3-HmiR-27b和Psi-EN2-UTR-S/AS共转染HEK-293T细胞，转染后48h检测双荧光素酶活性值，验证靶点的正确性。 ④通过嘌呤霉素筛选LV3-HmiR-27b质粒稳定转染的U251细胞，Westem blot技术检测EN2蛋白表达水平。 结果: ①MicroRNA靶点预测数据库包括Targetscan、miRanda、PicTar和DIANA-microT均能预测到hsa-miR-27b与EN2-mRNA-3'UTR有互补结合区，包含3个靶点。miRo数据库联合靶点数据库分析EN2参与神经元、中脑和间脑的发育。GO数据库对EN2基因分析显示EN2主要分布于细胞核内和细胞膜，参与神经元、中脑、间脑以及多细胞机体的发育，且正调控RNA聚合酶Ⅱ启动子的表达。 ②成功构建了含有双荧光素酶报告基因的表达载体Psi-EN2-UTR-S/AS。 ③成功构建了Hsa-miR-27b前体表达载体LV3-HmiR-27b，Real-time RT-PCR检测显示，其成熟体在HEK-293T细胞中能高水平表达，其表达水平比空白对照组高20倍。 ④双荧光素酶实验证明EN2是Hsa-miR-27b的靶基因。 ⑤通过嘌呤霉素成功筛选出LV3-HmiR-27b质粒稳定转染的U251细胞;与空白对照组和阴性对照组(shNC)细胞比较，LV3-HmiR-27b组U251细胞呈现细胞形态学改变，主要表现为细胞变细长，且神经细胞突起数量增多;Western blot分析显示EN2蛋白的表达水平下降。 结论: EN2为hsa-miR-27b调控的靶基因，hsa-miR-27b能下调U251细胞EN2蛋白的表达水平。HCMV可能通过上调hsa-miR-27b而下调EN2的蛋白表达这一机制，影响神经系统发育，导致畸形的发生。