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目的：神经胶质瘤是最常见的成人恶性脑肿瘤,且对放化疗不敏感。POU3F2, SOX2, SALL2以及OLIG2 (oligodendrocyte transcription factor 2,少突胶质细胞转录因子2)这4种转录因子可促进已分化的神经胶质瘤细胞重编程为具有裸鼠颅内成瘤作用的干细胞样细胞。我们前期研究发现：仅表达于中枢神经系统的转录因子Olig2表达于神经祖细胞以及引发人脑胶质瘤的细胞。敲低Olig2可提高胶质瘤祖细胞对射线的敏感性,但是这种作用依赖于p53的状态,此外,Olig2可抑制p53乙酰化,进而影响p53与其靶启动子的结合。本课题拟研究Olig2对人神经胶质母细胞瘤细胞裸鼠颅内成瘤、进展及放射敏感性的影响,并初步探讨其作用机制。方法：采用Olig2 sgRNA Lenti CRISPR及EGFP sgRNA Lenti CRISPR转染人胶质母细胞瘤BT145(p53野生型)及BT74细胞系(p53突变型,R248W),嘌呤霉素筛选稳定转染细胞株,采用Western blotting、免疫荧光、TOPO测序等方法验证转染及敲除效果。然后将Olig2 null细胞及EGFP对照细胞接种至裸鼠颅内,观察Oilg2敲除对裸鼠颅内成瘤的影响。然后,构建可诱导CRISPR载体,转染BT145及BT74细胞,嘌呤霉素及Blasticidin筛选稳定转染细胞株,然后分别将BT145及BT74细胞接种至裸鼠颅内,荧光素酶成像确定颅内有肿瘤生长之后,多西环素诱导体内Olig2敲低,观察体内诱导Olig2敲低对荷瘤鼠颅内肿瘤的生长情况以及裸鼠生存时间的影响。为了检测Olig2敲低对BT145细胞放射敏感性的影响,在体外BT145细胞培养体系,2Gy射线照射转染过可诱导CRISPR载体的BT145细胞后,检测Olig2敲低组及Olig2正常表达组细胞肿瘤球形成、p21的表达、以及CellTiter-Glo发光细胞活力检测检测细胞增殖。最后,接种已转染可诱导CRISPR载体的胶质母细胞瘤细胞BT145至裸鼠颅内纹状体,荧光素酶成像确定颅内有肿瘤生长之后,将裸鼠分为4组,分别给正常饲养,仅多西环素饲养以诱导敲低Olig2,2Gy*5次分割放疗,多西环素饲养以诱导敲低Olig2加2Gy*5次分割放疗,观察Olig2敲低对胶质母细胞瘤放射敏感性的影响。结果：成功构建敲除Olig2的LentiCRISPR细胞株及EGFP sgRNA对照。Olig2对p53野生型人胶质母细胞瘤细胞系BT145的裸鼠颅内成瘤是必须的,但是敲除Olig2对p53突变型细胞系的成瘤无影响。在可诱导CRISPR系统,加入多西环素可显著敲低Olig2,体内诱导Olig2敲低可抑制裸鼠颅内p53野生型BT145和p53突变型细胞系BT74的荷瘤鼠胶质母细胞瘤生长,延长荷瘤鼠存活时间(BT145细胞p=0.0057,BT74细胞p<0.0001)。Olig2敲低显著提高p53野生型胶质母细胞瘤细胞的放射敏感性：2Gy射线照射后,Olig2敲低组p21表达显著高于Olig2正常表达组(p=0.001)；胶质母细胞瘤细胞生长抑制率由15.6%±1.3%上升至34.70%±2.4%(p=0.002)。动物实验结果也表明,Olig2敲低可抑制裸鼠颅内p53野生型BT145胶质瘤生长,上调放疗后肿瘤组织cleaved caspase 3的表达(p=0.048),提高p53野生型胶质瘤细胞的放射敏感性,延长荷瘤鼠存活时间,对照组的中位生存时间为138天,Olig2敲低组的中位生存时间为161天,放射治疗组的中位生存时间为183天,Olig2敲低加放射治疗组的中位生存时间为210天,放射治疗的效果优于单独敲低Olig2表达,但是二者联合效果优于单纯放射治疗。结论：Olig2对p53野生型人胶质母细胞瘤细胞系BT145的裸鼠颅内成瘤是必须的,且Olig2敲低可抑制裸鼠颅内胶质母细胞瘤生长,增强荷瘤鼠对放射治疗的敏感性,延长荷瘤鼠存活时间,Olig2可能是p53野生型神经胶质母细胞瘤细胞放射增敏的潜在靶标。