论文部分内容阅读
目的:1.探讨含启动子序列的单链寡脱氧核糖核苷酸(ssPTODN)抑制胰岛素对人 α1(I)型胶原(COL1A1)基因启动子的激活。2.进一步确定胰岛素在人成 纤维细胞COL1A1 基因上的反应元件方法:1. 将含有氯霉素乙酰基转移酶(CAT) 基因与人COL1A1 基因-2483～ +42bp 片段的重组质粒(pCOLH12.5)稳定转染至人胚肺成纤维细胞 WI-38 中, 建立稳定转染的WI-38 细胞株,于该细胞株中加入不同剂量 的胰岛素,测CAT 值;2.合成全硫代的不同序列ssPTODN,其中 ssPTODN1 的序列为COL1A1 基因-129 至-105 间的25 个碱基。瞬时转染 不同剂量的ssPTODN1 于克隆的细胞株中,静息后,分别加入2.5μmol/ml 的胰岛素,测CAT 值。结果:1.成功建立了整合有pCOLH12.5 的WI-38 细胞株PN1。2.胰岛素浓度在 0、0.25、2.5、10μmol/ml 时的CAT 值(pg/ml)分别是920±94、1021 ±98、1595±101、1711±117。2.5μmol/ml 及10μmol/ml 的胰岛素显著 增加了COL1A1 基因启动子活性(P<0.01),二者的作用无显著性差异 (P>0.05)。3.胰岛素剂量为2.5μmol/ml,ssPTODN1 浓度分别为0、 40nM、80nM 、120nM、160nM时,细胞株PN1的各组校正后CAT值(pg/ml) 相应为:1593±87、1535±49、1370±54、1147±93、899±85;单独胰 岛素作用组的CAT 校正值为1601±23(pg/ml);ssPTODN1 浓度为120nM 和160nM 时,受胰岛素刺激所增加的CAT 值得到显著抑制(P<0.01), 但160nM 剂量时所抑制的水平低于启动子的基础CAT 值。结论: 1. ssPTODN1 能够抑制胰岛素对人成纤维细胞COL1A1 基因启动子的激 活。2.胰岛素在人成纤维细胞COL1A1 基因上的反应元件被定位于该 基因启动子近端-129 至-105 区域内。