【摘 要】
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为了研究各种目的基因的功能,在培养细胞内进行基因异位表达的技术已经被广泛采用。基因异位表达在一定程度上方便和提高了我们对基因功能和结构的研究。然而,由于大多数的转
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为了研究各种目的基因的功能,在培养细胞内进行基因异位表达的技术已经被广泛采用。基因异位表达在一定程度上方便和提高了我们对基因功能和结构的研究。然而,由于大多数的转基因方法对宿主细胞毒性很大,从而使得这一研究受到限制。在此基础上,可诱导基因表达系统(Inducible gene expression system)应运而生。可诱导基因表达系统的优点在于:(1)可以在短暂基因表达系统中。消除非同步转染细胞群(Non-homologously transfected cell popularion)之间的转染差异;(2)可以消除稳定基因表达系统中克隆变异(Clonal variation)的矛盾。 在端粒结合蛋白2(TRF2)基因功能的研究中,我们发现拓扑异构酶抑制剂依托泊甙(Etoposide)诱导白血病细胞株(HL-60细胞)DNA损伤和细胞凋亡时,有TRF2高表达。在药物作用后3-6小时后就有TRF2的显著上调,撤除药物继续培养后,TRF2上调逆转,DNA损伤恢复。表明TRF2的上调是肿瘤细胞对DNA损伤的生物学反应。根据上述研究,我们推测:TRF2的高表达维持了为肿瘤细胞复制和增殖所需要的端粒的功能。为了进一步研究TRF2在DNA损伤和细胞凋亡中的作用,我们期望能在血液肿瘤细胞建立可调控基因表达系统。本研究中,我们利用T-REx系统在霍奇金病细胞株L428上建立四环素可调控基因表达系统。应用Western blot和免疫组化,对于所有携带目的基因的可诱导表达质粒和阳性对照质粒在加四环素
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