原发性肝细胞癌(hepatocellular careinoma，HCC)在全球恶性肿瘤死亡率中居第三位，每年引起几乎100万人死亡。我国是肝细胞癌高发区，发病率已上升到恶性肿瘤的第二位，年死亡率占恶性肿瘤死亡率的第2～3位，近年来其发病率有增高的趋势。肝细胞癌现已成为严重危害人民生命安全的恶性肿瘤之一。 肝细胞癌的诊断主要依靠HE的镜下形态，大部分HCC病例根据细胞形态及组织结构就能诊断，但是也还存在一些恶性肿瘤需与HCC鉴别，如分化差的肝内胆管细胞癌(intrahepatic cholangiocellular carcinoma，ICC)，在镜下可呈与HCC相似的梁索型、腺管型和腺泡型；转移性腺癌由于原发部位较多样，可来源于大肠、肺、乳腺、胰腺、肾、胃及其他器官的恶性肿瘤，镜下组织形态也较为多样，与原发性肝细胞癌的鉴别可能比较困难；另外因为肝与肾、肾上腺的位置靠近，有时在右中腹局部出现的肿瘤难以辨别其原发部位。所以仅凭HE镜下形态诊断HCC还存在着较多的问题。随着免疫组织化学技术的发展，免疫组化染色己成为辅助诊断HCC的一种重要的手段：AFP、Hepatocyte、CK8、CK18等免疫组化指标已广泛应用。但由于HCC的生物特征的复杂性和免疫组化标记物本身的局限性，现有的免疫组化标记物仍然不能很好的解决HCC的诊断及鉴别诊断。因此寻找更多更准确的免疫组化标记物对于临床病理诊断工作来说有着十分重要的意义。 TTF-1抗体是诊断甲状腺、肺的肿瘤一个重要标记，其阳性染色位置在胞核。现在已广泛应用在肺、甲状腺及一些神经内分泌来源的肿瘤诊断及鉴别诊断中，并且在判断预后方面也有着非常显著的应用前景。最近发现TTF-1抗体在肝细胞癌内呈现较高比率的阳性表达，只是这种染色方式与一般的TTF-1染色不同，主要在细胞质表达。国内外已有学者证实TTF-1抗体在肝细胞癌内的胞质染色阳性率达到64-93％，而在肝胆管细胞癌、转移性腺癌、肾透明细胞癌等染色率均较低，故认为TTF-1抗体可作为一个辅助指标用于HCC的诊断及鉴别诊断。但其确切的染色机制尚未明了。 但是以往学者对TTF-1抗体在HCC的诊断的研究所用病例量较少(40-76例)，且鉴别病例还有一定局限，要真正将TTF-1抗体的细胞质染色应用于临床诊断还缺少足够的资料佐证。另外，TTF-1抗体是否与真正的TTF-1蛋白结合，而呈现胞质的染色?这些问题都还没有得到很好的解决。 针对以上研究现状，我们试图通过组织芯片技术收集大样本的病例，进行免疫组织化学检测，探明TTF-1抗体在肝细胞癌及其它须与之鉴别的病例中的真实阳性率，为TTF-1抗体应用于临床诊断提供更为确凿的数据支持。另外，我们拟通过蛋白印迹方法对TTF-1抗体的胞质染色机制进行初步的研究，以期为后续研究提供方向和指示。 实验目的： 本实验旨在应用组织芯片技术，收集大样本的肝细胞癌及其它需要与HCC进行鉴别的肿瘤，通过免疫组化方法检测TTF-1抗体表达情况，同时对其阳性表达与肝细胞癌的临床病理特征进行分析，以期发现更多的信息。此外，我们收集新鲜肝细胞癌及癌旁组织手术标本，运用Western Blot方法，探讨在肝细胞内是否存在真正的TTF-1蛋白。 材料与方法： 收集776例病例组织石蜡标本，运用组织芯片技术制作成14个组织芯片蜡块，并通过免疫组织化学技术检测TTF-1抗体在各种病例的阳性表达率。同时，提取7例新鲜肝细胞癌及7例癌旁肝组织手术标本的胞质及胞核蛋白，通过Western Blot蛋白印迹实验进行蛋白的相对分子量检测，探讨在肝细胞内是否存在真正的TTF-1蛋白。 实验结果： 本文共收集776例病例组织石蜡标本，包括299例肝细胞癌、31例肝胆管细胞癌、86例肝转移性肝癌、40例肾透明细胞癌、9例肝母细胞瘤、215例癌旁肝组织、96例肝血管瘤旁肝组织，制作成组织芯片，应用免疫组化方法检测TTF-1(8G3G7/1)抗体的表达情况，并对抗体的阳性表达与肝细胞癌的临床病理特征的联系进行了分析；同时应用Western Blot蛋白印迹方法检测在肝细胞癌及癌旁肝组织内与TTF-1抗体反应的蛋白的相对分子量。 (1)299例原发性肝细胞癌中TTF-1表达阳性者165例(55.2％)；31例肝胆管细胞癌阳性者2例(6.4％)；86例肝的转移性腺癌中阳性者3例(3.5％)；40例透明细胞癌中阳性者0例(096)；9例肝母细胞瘤中有3例(33.3％)出现部分瘤细胞的胞质阳性；215例癌旁肝组织表达阳性者213例(99.0％)；血管瘤旁肝组织92/96(95.8％)阳性染色。以上肿瘤组织及肿瘤旁肝组织中均未见TTF-1的胞核染色。 (2)TTF-1(8G7G3/1)抗体染色在肝细胞癌患者的年龄、血清AFP水平、肿瘤大小、肿瘤数量、有无癌栓形成等各组的分布上无明显统计学差异；TTF-1阳性表达与肿瘤的分化有关，在Edmondson分级为Ⅰ+Ⅱ组阳性率为58.1％(136/234)，高于分级为Ⅲ+Ⅳ组44.6％(29/65)的阳性率，组间差别具有统计学差异。 (3)收集的新鲜手术标本7例肝细胞癌中3例，7例癌旁组织中6例提取的胞质蛋白中可检测到与TTF-1(8G7G3/1)抗体反应的蛋白反应条带，该蛋白相对分子量约为160KDa。胞核蛋白未见反应条带。Western Blot有条带显示的病例其免疫组化检测均为阳性。而免疫组化阴性表达的癌组织，Western Blot均未见反应条带。 结论： 1、TTF-1(8G3G7/1)抗体在肝癌细胞内与肝胆管细胞癌、转移性腺癌、肾透明细胞癌内的表达的差异具有显明统计学意义。提示TTF-1抗体可作为一个辅助指标应用于肝细胞癌的诊断。 2、TTF-1(8G3G7/1)抗体在肝癌细胞内的表达与患者的年龄、血清AFP水平、肿瘤大小、肿瘤数量、有无癌栓形成均无明显的联系；与HCC的Edmonson分级呈负相关，即分级愈高，表达率愈低，分级愈低，表达率愈高。 3、在肝细胞癌、癌旁肝组织内与TTF-1(8G3G7/1)抗体结合的蛋白存在于细胞胞质内，其相对分子量约为160KDa，与TTF-1蛋白38KDa的分子量相关较大。提示在癌细胞及肝细胞胞质内与TTF-1(8G3G7/1)抗体反应的蛋白并不是TTF-1蛋白，而另一种分子量为160KDa的未知蛋白。这种蛋白的功能特性、编码基因等，其与肝肿瘤的发生的关系，与TTF-1抗体交叉反应的机制尚需进一步的研究。 4、TTF-1(8G3G7/1)抗体在肝细胞癌的表达与在癌旁肝组织、肝血管瘤旁肝组织有较大差异，在肝母细胞瘤主要在较成熟的胎儿型细胞表达，在胚胎型细胞不表达；且与肝细胞癌的分级呈负相关。提示TTF-1的表达可能与肝细胞的肿瘤的分化过程有关。但这种假设的还需更多实验的支持。