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在引起柑橘果实腐烂的真菌中,由青霉属病原菌导致的损失最为严重。本研究从柑橘各产区分离获得34株青霉属病原菌;结合不同培养基上的菌落形态特征,利用分子鉴定方法,将34株青霉属病原菌鉴定到种的水平;测定了这些菌株对伏令夏橙(Citrus sinensis cv. Valencia)和国庆四号(C.unshiu Marc. cv. Guoqing No.4)等柑橘果实的致病性强弱;利用扫描电镜和石蜡切片技术,观察青霉属病原菌对伏令夏橙果实的侵染过程;利用改良的生长速率抑制法,分析了34株病原菌对咪鲜胺的药敏感性;基于ITS、CO1和BenA等3种基因的碱基序列,利用Mega4.0软件,采用p-distance和NJ法,构建34株青霉属病原菌以及相关种的系统发育树,分析它们的发育位置和亲缘关系。主要研究结果如下:
1.单独使用ITS、CO1和BenA等3个基因中的任何一个基因,都不能将34株病原菌鉴定到种的水平。结合传统形态学方法,参考它们3种基因的序列比对结果,将它们分为5个种。
2.通过接种试验,发现指状青霉(Penicillium digitatum)和意大利青霉(P. italicum)对柑橘果实具有最强的致病性。接种产黄青霉(P. chrysogenum)的柑橘果实不发病。皮落青霉(P. crustosum)和波兰青霉(P. polonicum)的致病性介于它们之间。它们对宽皮橘温州蜜柑和伏令夏橙的致病性是一致的。
3.意大利青霉(P. italicum)、指状青霉(P. digitatum)和波兰青霉(P. polonicum)对咪鲜胺很敏感,EC50均低于3μg/ml。然而,大多数的皮落青霉(P. crustosum)对咪鲜胺却有较高的抗性。
4.利用扫描电镜发现:指状青霉(P. digitatum)接种于伏令夏橙果实后,孢子附着于果皮表面。利用伤口处的营养,迅速生长、扩繁。通过石蜡切片观察指状青霉(P. digitatum)侵染伏令夏橙果实的过程,发现白皮层先于黄皮层出现降解现象。
5.基于34株青霉属病原菌的ITS、CO1和BenA等3个基因的碱基序列,分析了它们的系统发育关系,确定了它们的系统发育位置。然而,它们的系统发育位置和亲缘关系随着基因的不同而出现差异。