功能型生物肥料优良芽孢杆菌的筛选及其作用机理研究

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芽孢杆菌是一种较理想的生物肥料添加菌株,具有抗逆性强、营养简单、繁殖速度快,有效活菌数量高、性能稳定,储存期长等优势而成为近年来的研究热点。此外,多数菌种具有防病、促生、解磷、解钾、固氮作用,对于发展生态农业,具有重要的现实意义。(1)通过平板对峙法、发酵液拮抗活性的测定、小白菜盆栽试验及土壤养分测定,获得2株广谱抑菌的芽孢杆菌B06和B07,B06对8种植物病原真菌的R2/R1为0.4~1.8,无菌滤液对8种植物病原真菌的抑制率为66.7%-87.5%。B07对8种植物病原真菌的R2/R1为0.23~1.21,无菌滤液对8种植物病原真菌的抑制率为55.56%~81.25%。获得5株对小白菜生长有较好促生作用菌株B03-B07,其中菌株B04的促生作用较强,在生长30d和60d时总干重比对照分别增加了12.8%和14.5%。获得7株初步具有活化养分作用的菌株B01、B09、B03-B07,仅菌株B06在施入30d和60d时具有活化N的作用,且活化率最高为19.5%。(2)菌株作用机理研究表明:菌株B06和B07均不产生几丁质酶,通过产生某种代谢物质,致使病原真菌菌丝细胞畸变、膨大呈泡囊状、菌丝细胞外壁皱缩干瘪,从而达到抑菌作用。菌株B04和B06各梯度稀释液具有明显提高甜瓜种子发芽率,促进胚轴和胚根生长的作用。菌株B04不同稀释梯度代谢液处理发芽率比对照增加了7.41%-93.3%;B04和B06各梯度处理后甜瓜种子胚轴和胚根的长度比对照增加了9.7%-61.2%,16.9%-32.2%和15.63%-59.9%,4.9%-26.8%。土壤养分结果表明,各菌株均有较好的分解有机质的作用。菌株B06兼具活化N、P和K的作用。菌株B03和B05有较好活化N氮的作用,B05有较好活化钾的作用。(3)通过形态学、生理生化鉴定和16SrDNA序列分析得出:B04为特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis),与Bacillus tequilensis10bT (HQ223107)相似度为99.914%。B06为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens subsp. plantarum),与Bacillus amyloliquefaciens subsp. plantarum FZB42T (CP000560)相似度达99.862%。B07为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens subsp. amyloliquefaciens),与Bacillus amyloliquefaciens subsp. amyloliquefaciens DSM7T (FN597644)相似度达99.793%。(4)采用L16(45)正交试验,选择温度、pH、转速、接种量和装液量对菌株B04、B06和B07液体发酵条件进行优化得出:菌株B04的最适发酵条件为温度30℃、pH7.0、转速180rpm/min、接种量7%、装液量25%,有效活菌数达到3.15×1011个cfu/mL以上,芽孢率达到82%,比优化前增加了7.9%。菌株B06的最适发酵条件为30℃、pH7.5、转速220rpm/min、接种量3%、装液量15%。有效活菌数达到2.1×1013个cfu/mL以上,芽孢率达到85%,比优化前增加了6.3%。菌株B07的最适发酵条件为温度30℃、pH7.0转速220rpm/min、接种量7%、装液量25%。有效活菌数达到了3.3×1013个cfu/mL以上,芽孢率达到92%以上,比优化前提高了12.2%。(5)田间促生试验表明:菌株B04和B06促生作用较强。B04菌剂处理后马铃薯产量比对照增加了3.4%;B06处理,产量比对照增加了15.3%。B06-B07和B04-B06-B07组合处理后,甜瓜产量分别比对照增加了23.1%和14.6%,促生作用较强。马铃薯产量分别增加了18.7%和23.3%。除菌株B06不能提高马铃薯POD酶活性外,菌株B06、B07、B06-B07和B04-B06-B07均能提高甜瓜叶片和马铃薯叶片PPO和POD酶的活性。B06-B07组合处理后,甜瓜叶片PPO和POD酶的活性最高,分别比对照增加了32.9%和74.3%。B04-B06-B07组合处理后,马铃薯叶片PPO和POD酶的活性最高,分别比对照增加了6.1%和12.3%。
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