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目的建立不同批号新益心宁神片的指纹图谱,对失眠模型大鼠镇静催眠作用的疗效进行评价,初步探究新益心宁神片镇静催眠作用机制,将指纹图谱和药效学实验结果相结合,分析其谱效关系,阐述新益心宁神片指纹图谱与镇静催眠药效的相关性。方法新益心宁神片指纹图谱的建立:采用高效液相色谱法(HPLC),筛选流动相组成、梯度洗脱条件及检测波长,进行方法学的考察,应用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2004A版)”进行相似度评价,建立10批不同批号新益心宁神片指纹图谱。新益心宁神片镇静催眠作用的药效学评价:采用腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA)法建立大鼠失眠模型,观察新益心宁神片对模型组大鼠一般状态,体重变化,戊巴比妥钠作用下各组大鼠睡眠潜伏期和睡眠时间。新益心宁神片镇静催眠作用的机制研究:通过HE染色观察大鼠海马神经细胞的病理形态变化,通过免疫组织化学法测定海马中5-HT、GABA的阳性表达,通过酶联免疫法(ELISA)检测海马组织中神经递质(5-HT、DA、NE、GABA)的含量。新益心宁神片镇静催眠作用的谱效关系研究:通过ELISA法测定大鼠海马中5-HT的含量,计算5-HT含量增加值,将新益心宁神片指纹图谱的“谱”,与药效学实验中5-HT的含量增加值的药“效”相结合,采用灰色关联度分析方法,计算各共有特征峰所代表的化学成分对镇静催眠药效的贡献值。结果确定了10批新益心宁神片指纹图谱的测定条件,建立了10批新益心宁神片指纹图谱,得到25个共有峰,通过与对照品指纹图谱的比对,指认了其中的8号为芦丁、11号峰为槲皮苷、12号峰为槲皮素、14号峰为灵芝酸A、18号峰为五味子醇甲和21号峰为五味子醇乙,该测定方法精密度、稳定性、重复性良好。药效学实验发现,通过戊巴比妥钠协同实验验证腹腔注射PCPA法可成功建立大鼠失眠模型,与空白组比较,模型组大鼠睡眠潜伏期明显延长、睡眠时间明显缩短,新益心宁神片低、中、高剂量组可明显缩短失眠大鼠睡眠潜伏期、延长失眠大鼠睡眠时间。作用机制研究发现,通过HE染色,观察神经细胞结构变化,免疫组化法结果显示,新益心宁神片低、中、高剂量组5-HT和GABA的表达量与模型组相比有明显增加,新益心宁神片低、中、高剂量组明显升高失眠大鼠脑内5-HT、GABA含量、降低失眠大鼠脑内DA、NE含量。通过灰色关联度分析法,将10批新益心宁神片指纹图谱中25个共有特征峰与镇静催眠药效相结合,得到新益心宁神片指纹图谱中各共有特征峰所代表的化学成分对镇静催眠药效贡献的大小顺序依次为:X11(槲皮苷)>X18(五味子醇甲)>X21(五味子醇乙)>X12(槲皮素)>X14(灵芝酸A)>X6(芦丁)>X19>X24>X7>X10>X9>X8>X20>X23>X25>X5>X16>X17>X22>X2>X1>X15>X4>X3>X13。结论本实验建立了10批不同批号新益心宁神片指纹图谱,并与镇静催眠作用药效相结合,通过灰色关联度分析法明确了新益心宁神片各共有特征峰对镇静催眠药效贡献的大小,为进一步探究新益心宁神片镇静催眠作用的有效物质奠定基础,通过谱-效关系研究,能够体现中药复方整体性的特点,为中药复方制剂谱效关系研究提供新的思路和实验依据。