新型人降钙素基因在大肠杆菌中的表达

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降钙素是一种重要的肽类激素,在肌体的钙磷代谢,骨的形成、分化和发育等相关的诸多环节中起着关键性作用。降钙素在临床上应用十分广泛,但其自然来源有限,必须以基因工程手段进行大规模生产才能满足需求。原核系统中表达出的降钙素无法完成C-末端的酰胺化,尚需体外处理才能具有较强的生物活性。 本文利用PCR技术扩增新型人降钙素基因编码序列hCT(将编码C-末端脯氨酸的密码子换为编码谷氨酰氨的密码子),将此基因克隆入大肠杆菌非融合型表达载体pBV220及融合型表达载体pET42a中。重组表达载体pET42a/hCT转化到大肠杆菌BL21(DE3)plys中诱导表达,经SDS-PAGE证实细胞裂解物中含有与预期位置相同的融合蛋白,经Western Blot鉴定证明此融合蛋白具有人降钙素的免疫活性。表达条件优化后,可溶性蛋白的表达量占胞内总蛋白的10%。经超滤浓缩后,融合蛋白在Xa因子作用下产生重组的新型降钙素,进一步分离纯化得到该蛋白的初级纯品。大鼠体内降血钙试验表明新型降钙素具有降血钙活性。
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