论文部分内容阅读
脑胶质瘤是中枢神经系统发生率最高的肿瘤,目前国内外针对恶性胶质瘤的治疗原则,还是强调以手术切除肿瘤为主的基础上,联合放疗和化疗,但疗效并不满意。近几年在胶质瘤化疗方面取得了一些新的进展,如替莫唑胺(temozolomide,TMZ)是新一代烷化剂类化疗药,以其有效(中位生存期较传统化疗者延长一个月)、低毒、使用方便(可口服)等特点,增强了我们对胶质瘤化疗的关注,为治疗恶性胶质瘤带来了新的希望。已有文献报道,胶质瘤切除后于瘤腔内放置卡莫斯汀(BCNU)缓释片可提高局部药物浓度,延缓肿瘤复发。有鉴于此,我们将TMZ制成缓释微球(P-TMZ),于肿瘤原位缓慢释放,观察其对胶质瘤的化疗疗效。第一部分替莫唑胺缓释微球对胶质瘤细胞系SHG-44体外抑瘤效应的观察目的:观察替莫唑胺缓释微球在体外对SHG-44人脑胶质瘤细胞系的抑制效应。方法:将人脑胶质瘤细胞系SHG-44复苏后接种于含10%小牛血清的DMEM培养液,传代5-6次后,取生长状态良好的肿瘤细胞,以0.25%的EDTA-胰蛋白酶消化后,用培养液稀释为1×10~4/ml,以100μl/孔接种于96孔板。设P-TMZ、TMZ、BCNU、P-0(空白微球)和空白对照五组,前四组每组设5个浓度(1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml),待测药物用培养液混悬后加入相应组内(空白对照组加入等体积的DMEM培养液)。以MTT法测定替莫唑胺缓释微球对胶质瘤细胞的抑制效应,加药96h后检测不同药物浓度在570nm处的OD值,计算其IC50。结果:MTT结果显示:P-TMZ、TMZ和BCNU对SHG-44胶质瘤细胞生长的体外抑制效应明显,三者的IC50分别为6.63±0.26μg/ml、7.98±0.24μg/ml和8.41±0.26μg/ml,均低于10μg/ml,相对于空白微球(P-0)均有显著统计学差异(P＜0.01)。结论:P-TMZ保留了TMZ的抑瘤活性,为进一步研究其体内抑瘤效应奠定了基础。第二部分替莫唑胺缓释微球治疗人脑胶质瘤皮下移植瘤的实验研究目的:观察替莫唑胺缓释微球(P-TMZ)对SHG-44人脑胶质瘤皮下移植瘤的抑瘤效应。方法:将SHG-44胶质瘤细胞(1×10~7)注射于Balb/c裸小鼠右腋皮下,二周后待皮下移植瘤生长至体积约100mm~3,取出肿瘤再以组织块接种的方法皮下传代(2mm~3/鼠),待肿瘤生长至约65mm~3时,将荷瘤鼠随机分为P-TMZ组、替莫唑胺(temozolomide,TMZ)组、P-TMZ+TMZ联合治疗组、卡莫斯汀(BCNU)组、空白微球(P-0)阴性对照组和生理盐水(NS)空白对照组,然后将P-TMZ(500mg/kg)、和P-0(500mg/kg)以DMEM培养液混悬至终体积150μl,分别经皮多点穿刺缓慢注入肿瘤组织内;TMZ50mg/kg灌胃,每日一次,连续5天;BCNU(40 mg/kg)尾静脉注射一次;NS组为NS150μl瘤内注射。每4天1次测量荷瘤鼠体重及皮下肿瘤长径和短径,计算肿瘤体积。结果:在皮下抑瘤实验中,P-TMZ、P-TMZ+TMZ和BCNU抑瘤效应明显,抑瘤率均明显高于P-0、NS(P＜0.01),三种药物抑瘤效应亦优于TMZ(P＜0.05),TMZ具有一定的抑瘤效应,高于P-0、NS(P＜0.05)。结论:P-TMZ保留了TMZ的抑瘤活性,在皮下肿瘤局部应用时抑瘤效果优于TMZ。第三部分替莫唑胺缓释微球治疗人脑胶质瘤颅内原位移植瘤的实验研究目的:建立人脑胶质瘤裸小鼠颅内肿瘤模型,并观察在此模型中替莫唑胺缓释微球(P-TMZ)对胶质瘤生长的抑制效应。方法:将2.0mm~3SHG-44皮下移植瘤组织块植入裸小鼠右尾状核,于接种后0d、5d、10d、15d、20d、25d处死荷瘤鼠(每次3只),解剖取全脑行连续脑轴位冰冻切片,HE染色后测量肿瘤最大层面处最短径(a)和最长径(b),根据公式计算肿瘤体积V=a~2×b/2,绘制肿瘤生长曲线。同法制作裸小鼠脑内移植瘤模型,接种后10天将动物随机分为7组,设P-TMZ组、TMZ(灌胃)组、P-TMZ+TMZ(灌胃)联合用药组、TMZ(颅内注入)组、BCNU(尾静脉注射)组、P-0组和生理盐水(NS)组,每组9只鼠。然后将P-TMZ(100mg/kg)、TMZ(50mg/kg,颅内注入)和P-0(100mg/kg)以DMEM培养液混悬至终体积20μl缓慢注入颅内肿瘤组织内,TMZ(50mg/kg,灌胃)每天灌胃一次,共5天,BCNU(40mg/kg)经尾静脉注射一次。治疗28天后处死小鼠,冰冻切片、HE染色、测量颅内肿瘤大小。结果:P-TMZ组、P-TMZ+TMZ组、BCNU组、TMZ(灌胃)组和TMZ(颅内注入)组的颅内肿瘤体积明显小于P-0组、NS组(P＜0.01);P-TMZ组、P-TMZ+TMZ组、BCNU组三组间无明显差异(P＞0.05),但三组抑瘤率均优于TMZ灌胃组(P＜0.01),亦优于TMZ(颅内注入)组(P＜0.05),TMZ灌胃组与TMZ颅内注入组无差异(P＞0.05)。结论:颅内治疗实验显示,P-TMZ不仅保留了TMZ的抑瘤活性,且在颅内肿瘤局部应用比TMZ口服短期(28d)抑瘤效果更好,值得进一步深入研究。