论文部分内容阅读
天然免疫系统是宿主抵抗病原入侵的第一道防线,它对病毒等病原微生物的识别主要依赖宿主的模式识别受体(pattern-recognition receptor, PRR)。病毒核酸被模式识别受体识别后能引发一系列信号事件诱导Ⅰ型干扰素的产生。Ⅰ型干扰素在保护宿主的抗病毒天然免疫反应中发挥着极其重要的作用,同时也是诱发自身免疫疾病的元凶。近年来,对于病毒核酸诱导Ⅰ型干扰素的信号转导的研究取得了很大进展。其中,病毒RNA能被RIG-I样受体(RIG-I like receptor, RLR)家族成员RIG-I (retinoic acid inducible gene I)和MDA5(melanoma differentiation-associated gene5)识别,它们进一步招募下游接头蛋白VISA (virus-induced signaling adaptor)和MITA (mediator of IRF3activation)激活转录因子NF-κB (nuclear factor kappa B)和IRF3/IRF7(interferon regulatory factor3/7),诱导Ⅰ型干扰素和其它抗病毒效应因子的表达；病毒DNA能被一系列胞浆DNA受体(cytosolic DNA sensor)识别,这些受体依赖接头蛋白MITA激活转录因子NF-κB和IRF3/IRF7,随后诱导Ⅰ型干扰素的转录表达。近年来的研究表明,MITA是病毒诱导Ⅰ型干扰素表达不可或缺的信号分子。目前为止,对于MITA的调控机制,特别是翻译后修饰如何调控MITA的活性还没有被完全阐明。在我们的研究中,我们发现E3泛素连接酶RNF26(RING finger protein26)能促进MITA的第150位赖氨酸残基发生K11连接的多聚泛素化修饰。一方面,RNF26保护MITA免于RNF5介导的K48连接的多聚泛素化修饰,抑制MITA的降解,从而促进Ⅰ型干扰素的迅速和有效的诱导；另一方面,RNF26能通过自噬途径降解IRF3从而限制Ⅰ型干扰素的过度激活。相应的,在多种细胞中,下调RNF26表达分别在病毒感染早期抑制IFNB1基因的表达,在病毒感染晚期促进IFNB1基因的表达。我们的发现显示RNF26通过两种不同机制时序性调节抗病毒天然免疫反应,这一发现加深了我们对细胞抗病毒反应的机制的理解。另一个病毒诱导Ⅰ型干扰素过程中的关键信号分子VISA最初被报道定位于线粒体,最新的研究表明VISA也定位于过氧化物酶体。并且定位在线粒体和过氧化物酶体上的VISA在病毒感染的不同时期介导不同的抗病毒效应。过氧化物酶体是新的抗病毒天然免疫信号转导通路的平台,我们以这一发现为契机,进行了过氧化物酶体相关抗病毒蛋白的筛选。在本研究中,我们富集了SeV病毒刺激或不处理的HepG2细胞的过氧化物酶体,通过稳定同位素的双甲基化标记方法对样品进行标记,进行蛋白质相对定量的研究。我们对样品进行质谱分析,鉴定到695个具有重复性的定位在过氧化物酶体和相关亚细胞组分上的蛋白,包括67个SeV病毒刺激后表达上调的蛋白和73个病毒刺激后表达下调的蛋白。其中,部分基因在抗病毒反应中的功能已经被报道。在我们鉴定到的候选蛋白中,我们选择了部分验证了它们在抗病毒天然免疫反应中的功能。在本研究中,我们有效的富集了HepG2细胞的过氧化物酶体并筛选出了参与抗病毒天然免疫反应的蛋白,这些工作能帮助我们更好地了解抗病毒天然免疫反应的机制。