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目的:本课题利用单核细胞定向诱导分化技术获得不同表型巨噬细胞(M1、M2),用不同浓度姜黄素对M1型巨噬细胞进行诱导干预,通过细胞悬液创周局部注射的手段对大鼠创伤模型进行差异化处理,并通过若干愈合指标、细胞因子的测定,讨论不同浓度姜黄素诱导的M1型巨噬细胞后对创面愈合的影响。方法:提取大鼠股骨骨髓细胞,并通过差速贴壁、M-CSF刺激等方法纯化、激活获得实验所需的巨噬细胞,应用流式细胞技术分析培养细胞结果。使用LPS刺激巨噬细胞M0向M1转化,IL-4诱导巨噬细胞M0向M2转化,并应用流式细胞技术分析验证M1、M2诱导的有效性。应用不同浓度姜黄素诱导M1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞极化并获得相应细胞混悬液;应用流式细胞技术分析姜黄素对M1诱导的极化效率,大鼠创伤模型的制备及其可用性的评价。实验大鼠背部制作6枚直径6mm全层皮肤贯通伤模型,通过创面愈合率、HE染色分析评价所制模型的可用性。创面的实验条件干预及评价:实验动物分1天组、4天组、7天组、10天组、14天组5组,每组5只。按照随机双盲的原则分别对每只大鼠的六枚创面做如下处理:(1)局部(皮下、真皮层及创基浸润,同下)注射注射灭菌PBS;(2)局部注射M1+Cur0组细胞悬液;(3)(6)不做任何处理;(4)局部注射M1+Cur25组细胞悬液;(5)局部注射M2+Cur0组细胞悬液。到达实验天数后,处死实验鼠取标本进行愈合相关指标的检测、分析。通过创面未愈面积宏观描述愈合速率的差异,HE染色、MASSON染色、免疫组化微观分析导致愈合速率差异存在的原因。结果:1.大鼠骨髓细胞培养CD45、CD68双阳性细胞比率可达86.5%。2.姜黄素刺激M1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞极化的最佳作用浓度为25μmol/L,极化效率为29.59%。3.大鼠背部不同解剖位置的六枚创面愈合速率无统计学差异,HE染色结果无明显差异。相对于空白对照组,M1+Cur0组创面可观察到愈合延迟,HE染色及MASSON染色提示创面存在炎细胞浸润时间长、肉芽组织生长缓慢;创面愈合率、免疫组化(VEGF、b FGF、TGF-b1)定量分析提示相关指标较空白对照组存在统计学差异。M2+Cur0组及M1+Cur25组创面可观察到愈合提前,上述指标分析结果与M1+Cur0组相反且存在统计学意义。PBS组与空白对照组间无统计学差异。结论:1.M-CSF可体外诱导大鼠骨髓细胞形成巨噬细胞。2.LPS、IL-4分别可诱导巨噬细胞向M1、M2极化。3.姜黄素可诱导M1型巨噬细胞向M2型极化,且最佳极化效率29.59%。4.打孔器法制备大鼠背部创伤愈合模型的方法可用。5.姜黄素调控分型介导的巨噬细胞促进创面愈合。