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目的本研究在前期对龟鹿二仙胶及其拆方相关研究的基础上,探讨化湿定痛汤治疗膝骨关节炎的作用机制,以及化湿补肾法(即化湿定痛汤与龟鹿二仙胶合方)对大鼠膝骨关节炎影响的观察。方法1.大鼠膝骨关节炎模型的建立与鉴定将56只SD大鼠用随机数字表法进行分组:先选出16只用于模型鉴定,分为空白组和模型组,各8只;用膝关节腔注射木瓜蛋白酶的方法建立KOA模型,造模后取材,检测两组大鼠血清中IL-1、IL-6的表达量,并用HE染色镜下观察进行模型鉴定。2.化湿补肾法对大鼠膝骨关节炎影响的实验研究将余下的40只大鼠随机分为5组:空白组、模型组、化湿定痛汤组(简记化湿组)、龟鹿二仙胶汤组(简记龟鹿组)、化湿定痛汤合龟鹿二仙胶汤组(简记化湿龟鹿组),每组8只。对空白组外的大鼠造模,空白组和模型组予生理盐水灌胃,其余各组予相应的中药灌胃,干预4周后取材。HE染色观察软骨形态,免疫组化检测软骨中MMP-13、MEK1/2的表达量;PCR检测软骨中ERK1/2的表达量;ELISA检测软骨中NO、滑膜中NF-κB、TLR-3及血清中IL-1、IL-6的表达量。结果1.模型鉴定结果:造模结果HE染色观察并进行Mankin评分后发现:与空白组相比,模型组评分明显升高,P<0.05;ELISA检测结果示:模型组IL-1、IL-6的表达量均高于空白组,P<0.05。说明KOA模型建立成功。2.化湿补肾法对大鼠膝骨关节炎影响的研究结果:(1)HE染色结果:空白组软骨结构完整,表层形态正常,布局紧密且均匀;模型组表层、移行层有缺损,细胞成团分布,增生明显;化湿组与模型组相当;龟鹿组表层破损,移行层较完整,有增生;化湿龟鹿组表层少量破损,移行层完整,有增生。(2)免疫组化检测结果:(1)龟鹿组MMP-13的表达量低于模型组,P<0.05,化湿龟鹿组低于龟鹿组,P<0.05;(2)龟鹿组MEK1/2的表达量高于模型组,P<0.05,化湿龟鹿组高于龟鹿组,P<0.05。(3)ELISA检测结果:(1)化湿组TLR-3、NF-κB、IL-1、IL-6的表达量低于模型组,P<0.05;化湿龟鹿组低于龟鹿组,P<0.05;(2)龟鹿组NO的表达量低于模型组,P<0.05,化湿龟鹿组低于龟鹿组,P<0.05。(4)qPCR检测结果:龟鹿组ERK1/2的表达量高于模型组,P<0.05,化湿龟鹿组表达量高于龟鹿组,P<0.05。结论1.化湿定痛汤能够通过减轻大鼠关节软骨和滑膜的炎性水肿和局部肿胀程度,以增强龟鹿二仙胶汤原有疗效。2.运用化湿补肾法的化湿龟鹿组抑制软骨细胞凋亡的效果优于龟鹿组,这与化湿定痛汤同龟鹿二仙胶汤合用能够降低NF-κB、TLR-3、IL-1、IL-6的表达量来抑制MEK/ERK信号通路的激活,进而降低NO、MMP-13的表达有关。