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目的:探讨巨噬细胞诱导型C型凝集素受体(Mincle)在烟曲霉菌所引起的小鼠真菌性角膜炎中的作用,明确Mincle如何影响小鼠角膜细胞因子、粘附分子的表达以及角膜组织中一氧化氮(NO)的生成,进而参与小鼠真菌性角膜炎的固有免疫反应。方法:分别使用Mincle激动剂TDB或Mincle中和抗体(Mincle Ab)预处理C57BL/6小鼠,之后用具有活性的烟曲霉菌菌丝感染角膜建立小鼠真菌性角膜炎模型。相应的对照组感染前分别使用DMSO或Ig G作预处理。使用裂隙灯显微镜对角膜病变进行观察,并根据临床表现对感染严重程度进行炎症评分。采用Real time PCR及免疫荧光染色检测角膜中Mincle的m RNA及蛋白表达水平。Real time PCR及ELISA法分别检测激动或抑制Mincle后小鼠角膜中细胞因子(IL-1β,TNF-α,IL-6)的m RNA及蛋白表达情况。Real time PCR检测激动或抑制Mincle后小鼠角膜中趋化因子(CXCL-1,MIP-2)的m RNA表达水平。免疫荧光染色实验评价角膜中性粒细胞聚集浸润程度。Griess法测定小鼠角膜中NO的生成水平。结果:1.与正常小鼠角膜相比,烟曲霉菌感染后的角膜中Mincle m RNA和蛋白水平均有显著升高,m RNA表达水平在1天达到高峰。使用Mincle激动剂TDB预处理小鼠角膜后,Mincle的表达显著升高,而中和抗体Mincle Ab预处理后,荧光强度明显下降,Mincle表达被有效阻断。2.单纯真菌感染处理后,小鼠角膜轻度浑浊,出现形态不规则的溃疡;DMSO及Ig G预处理组与单纯真菌感染组相比无明显差异,临床评分差异无统计学意义。TDB预处理组小鼠烟曲霉菌性角膜炎与DMSO对照组相比,溃疡面积小、深度浅,临床评分差异具有统计学意义(P<0.01)。Mincle Ab预处理组的小鼠与Ig G对照组相比,角膜溃疡面积大、浸润深,且发生角膜穿孔的几率增加,临床评分差异具有统计学意义(P<0.01)。3.TDB预处理后,烟曲霉菌感染的小鼠角膜中IL-1β、TNF-α及IL-6的m RNA及蛋白表达水平较DMSO对照组均有显著升高(P<0.01)。Mincle Ab预处理后,IL-1β、TNF-α及IL-6的m RNA和蛋白表达水平较Ig G对照组均明显下降(P<0.01)。4.在小鼠烟曲霉菌性角膜炎模型中,CXCL1和MIP-2的m RNA的表达水平在TDB激动Mincle之后上升(P<0.01),Mincle Ab阻断Mincle后下降(P<0.01)。中性粒细胞在角膜中聚集情况的变化趋势与之相一致,正常角膜中几乎没有中性粒细胞,单纯烟曲霉菌感染组及DMSO对照组、Ig G对照组可在角膜组织中发现中性粒细胞浸润,单纯真菌感染组与对照组之间无明显差异,TDB预处理组可观察到溃疡周围聚集大量的中性粒细胞,Mincle Ab预处理组中性粒细胞则明显减少。5.正常小鼠角膜中可以检测到NO存在,烟曲霉菌感染后,角膜组织中NO含量较正常升高。当使用TDB预处理后,角膜组织中NO水平较DMSO对照组显著上升;Mincle Ab预处理后,角膜组织中NO水平较Ig G对照组明显下降。结论:Mincle参与了小鼠烟曲霉菌性角膜炎的固有免疫反应过程。可以通过调控炎症因子、趋化因子的分泌,募集中性粒细胞在炎症部位的聚集而促进炎症反应,同时可以通过调节角膜组织中NO的浓度从而发挥细胞毒作用对真菌进行直接杀伤。