基于抗体和受体的IAA生物传感器的研究

来源 :湖南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:youqing_2009
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吲哚乙酸(Indole-3-acetic Acid,IAA)是一种在植物中普遍存在的植物激素,在植物的生长发育过程中起着重要的调控作用。因此,建立简便、快速和准确的IAA检测方法具有重要意义。目前,在众多的植物激素检测方法中,电化学方法因其高灵敏度和动态监测的优良性能而受到重视。本论文通过电沉积纳米金修饰电极,然后固定IAA单克隆抗体/生长素受体TIR1(Transport Inhibitor Response 1)蛋白在修饰电极表面,构建对IAA具有亲和吸附能力的生物传感电极。具体研究结果如下:1.本研究利用电化学沉积的方法将纳米金修饰到电极表面,提高了电极的导电性,并使其具有吸附蛋白的能力。实验发现,电极的最佳修饰条件是在浓度为20 mmol/L的氯金酸溶液中-0.2 V恒电位沉积90 s。基于IAA单克隆抗体构建了IAA的免疫型传感器。同时对传感电极的构建条件(吸附温度、蛋白浓度、吸附时间)进行了优化。采用电化学检测法检测IAA与固定抗体在电极上的结合。线性响应范围为1-500 ng/m L,检测限为0.1 ng/m L。2.在相同的电极修饰条件下用纳米金修饰电极,再吸附TIR1蛋白并用牛血清蛋白进行封闭。纳米金修饰的电极表面能特异性吸附待检测液中的IAA,形成TIR1-IAA复合物,导致电极表面的电子传递速率下降,电化学工作站检测到的传感器工作电极表面的电流峰值降低,且在一定IAA浓度范围内呈线性关系。进而对传感器的构建条件进行了优化,其中包括吸附温度、蛋白浓度和吸附时间。结果表明,基于IAA受体的IAA生物传感器明显优于基于单克隆抗体的IAA免疫型传感器。线性响应范围为0.5-500ng/m L,呈线性关系,检出限为0.01 ng/mL。
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