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观察比较恶性胸水中DC,TIL,CTL,PBMCs四种免疫细胞的体外抗自体肿瘤细胞及其调节免疫功能的作用,为恶性胸水的生物治疗寻找到较好的方法;多方面比较无血清培养基与完全培养基对体外诱导扩增恶性胸水中免疫细胞的支持作用.方法:病例选取2003年3月-2004年3月华北煤炭医学院附属医院及人民医院诊治的68名有明确病理诊断的恶性胸水患者.1.获取胸水中单个核细胞(PEMCs):密度梯度离心法;2.获取胸水中肿瘤浸润淋巴细胞(TIL):经过两步贴壁获取非贴壁的TIL,分别用无血清培养基和完全培养基培养,以小剂量IL-2活化7天获取TIL并计数;3.获取胸水中树突状细胞(DC):PEMCs经过两步贴壁获取先贴壁的单个核细胞,分别用无血清培养基和完全培养基培养,以GM-CSF,IL-4与TNF-α联合诱导7天获取DC并计数;4.获取胸水中肿瘤细胞:两步贴壁法获取再贴壁的肿瘤细胞,分二部分,一部分用于肺癌细胞全抗原制备,另一部分冻存,为细胞毒实验所用.5.获取肿瘤细胞全抗原(TCA):肺癌细胞经过反复冻融获取TCA;6.获取CTL细胞:将经过肿瘤全抗原致敏的DC与经过IL-2活化的TIL混合,分别于无血清培养基和完全培养基中培养,7天后获取CTL细胞并计数;7.细胞鉴定:经电镜形态学分析,SABC法检测分析鉴定DC;经SAP法和流式细胞仪表型分析鉴定TIL细胞;经瑞氏染色分析鉴定肿瘤细胞;经SAP法分析鉴定CTL细胞;8.将DC细胞,TIL细胞;CTL细胞;PBMCs细胞分别作为效应细胞杀伤肿瘤细胞;MTT法分别检测上述细胞在不同培养基支持物的作用下对肿瘤细胞的杀伤活性;9.SAP法检测 TIL与CTL经不同培养基培养前后T淋巴亚群的变化.结论:1.自体恶性胸水细胞经培养可大量获得DC细胞,TIL细胞,CTL细胞及肿瘤细胞.2.无血清培养基培养细胞增殖能力强,免疫能力强,用于培养临床治疗用的免疫细胞优于完全培养基.3.CTL细胞,TIL细胞,DC细胞和PBMCs细胞均具有对自体肿瘤细胞杀伤的作用,CTL细胞杀瘤作用及增殖能力均强于TIL细胞,DC细胞和PBMCs细胞,故CTL细胞用于恶性胸水免疫治疗优于上述3种细胞.4.自体鳞癌细胞和腺癌细胞均能被CTL,DC,TIL,和PBMCs杀伤,但二者的被杀伤率无显著差异.