L-丝氨酸产生菌的选育及其发酵条件的研究

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本论文对发酵法生产L-丝氨酸进行了研究。研究内容主要包括了L-丝氨酸产生菌的选育及其发酵条件的优化。采用纸层析分光光度计法对发酵液中L-丝氨酸进行了定性、定量分析,绘制出了L-丝氨酸和甘氨酸的标准曲线,并推导出了通过测定吸光度来计算发酵液中L-丝氨酸和甘氨酸含量的计算公式。研究发现该法具有较高的准确度和精密度,并且操作方便、易于掌握,非常适合在L-丝氨酸产生菌筛选中应用。以实验室保藏微球菌株LJW-01(D-SerR,GlyR,MthR)为出发菌株,采用DES和NTG诱变,分别以磺胺胍(SG)和高浓度甘氨酸为药物平板,以蛋氨酸为缺陷型,成功选育出一株丝氨酸产量较高菌株ZC-8(D-SerR,GlyHR,MthR,SGR,Met-),该菌株在未经优化的条件下发酵液中可积累L-丝氨酸6.2g/L,比出发菌株产量提高了一倍多。通过传代实验表明,该菌产酸稳定,遗传标记较好的保存,适合发酵生产L-丝氨酸。对菌株ZC-8的种子培养基和发酵培养基进行优化,确定最优种子培养基组成为(g/L):葡萄糖20,玉米浆20,(NH4)2SO4 20,KH2PO4 1,MgSO4·7 H2O 0.2。最佳培养条件:装液量为40mL/250mL三角瓶,摇瓶转速为100r/min,培养温度为30℃,pH7.0~7.5,种龄为10h。最优发酵培养基组成为(g/L):甘氨酸35,葡萄糖5,(NH4)2SO4 22,KH2PO4 1,MgSO4·7H2O 0.8,玉米浆14,CaCO3 20。发酵最佳摇瓶培养条件:装液量为25mL/250mL三角瓶,接种量10%,摇瓶转速为100r/min,培养温度为30℃,pH8.0~8.5,发酵周期为72h。菌株ZC-8在优化条件下的L-丝氨酸产量(9.82g/L)比未优化时(6.2g/L)提高了58.4%。
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