前言 移植技术的改进、UW液和新型免疫抑制剂的研发和应用以来，临床器官移植的长期存活率得到明显提高，并已成为终末期器官功能衰竭病人的最佳治疗方案。然而，同种异体排斥反应仍然是器官移植的主要障碍。而且临床器官移植患者几乎无一例外地要长期、正规地应用免疫抑制剂。同种异体排斥反应的实质是T细胞活化。经典移植免疫学理论认为，T淋巴细胞的活化需要两个信号。信号1为抗原递呈细胞（Antigen presenting cells，APC）表面的主要组织相容性抗原／外源性抗原复合物（MHC／Ag complex），与T细胞表面的T细胞受体／CD3复合物（TCR／CD3 complex）相结合；信号2为APC或B细胞表面的共刺激抗原分子与其配体的相结合（共刺激通路）。在共刺激通路中，起主要作用的是B7-CD28或CTLA4和CD40-CD154信号途径。CTLA4在T细胞活化后迅速上调表达，并对T细胞起负性调节作用。研究表明，如果缺乏共刺激信号，TCR介导的抗原信号刺激会导致T细胞无能，T细胞无法分泌IL-2，即T细胞无法进入活化、增殖阶段。 尽管大量的证据表明，CD28分子在启动T细胞免疫反应中提供了关键的共刺激信号，然而并非所有情况下T细胞活化都依赖于B7-CD28信号。研究表明，CD28^-／-小鼠仍能对同种异体移植皮肤发生排斥反应。阻断CD40-CD154交联也不能完全抑制同种异体小鼠心脏移植排斥反应。近年来研究表明，CD8⁺T细胞不依赖CD28或CD154提供的共刺激信号仍可以继续得以活化，说明在T细胞的活化中还可能存在其他共刺激分子或共刺激信号途径。 4-1BB是CD4⁺、CD8⁺ T细胞表面的一种Ⅰ型膜表面糖蛋白分子，属于肿瘤坏死因子受体超家族成员，在T淋巴细胞活化过程中发挥着协同刺激作用。4-1BB分子仅表达于活化的T细胞和NK细胞表面，在静止T细胞表面不表达。其配体4-1BBL分子则表达于活化的APCs包括DCs表面。4-1BB与其配体分子4-1BBL的交联在维持T细胞活化和放大T细胞毒性效应中发挥重要的作用。 浙江大学博士学位论文研究表明，活化T细胞在反复的抗原刺激下CD28分子表达下调，并容易发生T细胞活化后凋亡（activation indueed eell death，AICD）。而在TcR提供抗原刺激信号下，4一IBB足以提供T细胞所必需的共刺激信号或协同CD28分子的共刺激信号，维持T细胞活化状态，抑制A工CD的发生。最近的研究表明，在缺乏CD28信号的条件下，4一IBB同样可以诱导T细胞的大量增殖和工L一2的上调表达。动物实验则表明，应用抗4一IBB单克隆抗体可以极大地刺激CDS‘T细胞的增殖并激发同种异体移植排斥反应，说明4一IBB途径是细胞免疫应答过程中的一个重要的共刺激信号途径。 4一IBB分子并不象CD28分子一样结构性地表达于T细胞表面，本研究应用小鼠腹腔内异位心脏移植模型，通过应用病理学、RT-PCR、W亡stem blot、EMSA、ELIsA、免疫荧光、激光共聚焦和流式细胞技术等免疫学及分子生物学实验技术手段，探索4一IBB分子途径在同种异体移植物急性排斥反应中的表达情况及其意义。同时探索免疫抑制剂环抱霉素A（CyclosporineA，CsA）和他克莫司（Tacrol加us，FK506），能否有效地抑制异基因小鼠心脏移植排斥反应时T细胞的4一IBB分子表达及其可能的机制。 材料与方法 C57BL/6和Balb/c小鼠作为移植供体，Balb/c小鼠作为移植受体，建立小鼠腹腔内异位心脏移植模型。按移植前后处理方法不同，随机分为4组:A组为Balb/c一alb/c同基因对照组，移植前后未作处理;B组为C57BU6一alb/c急性排斥组，移植前后未作处理;C组为C57BL/6一Balb/c异基因移植csA组（C 57BL/6一alblc十csA），移植日开始给予环抱霉素A（csA）10.omg·k扩·d一，腹腔注射x 14天;F组为e57BL/6一Balb/c异基因移植FK5o6组（C57BL/6一Balb/c+FK506），移植日开始给予他克莫司（Tacrolimus，FK5o6）1 .omg·kg-，·d一，腹腔注射X一4天。移植后x、3、5、7天切取移植心脏用于病理学检测、移植心肌组织中基因产物的逆转录聚合酶链式反应和浸润淋巴细胞的激光共聚焦检测;受体脾用于淋巴细胞亚群流式细胞术分析、激光共聚焦检测、脾细胞TRAFZ和BCI一2表达的蛋白印迹分析和NF一KB（p65）和NFATcl活性检测以及脾组织内细胞因子水平检测。另外设亚组观察移植后一般情况和移植心存活时间。 实验所得数据以反士s表示，统计学处理用sPSsn.O软件完成。各组受体移植心存活率评估以Kaplan书eier法检验，组间存活时间的比较以非参数Mann朴itneyU检验进行，其它参数作 浙江大学第一附属医院2 浙江大学博士学位论文one--way ANOVA分析及q检验，坏0.05为差异有显著性。 结果 Balb/e一Balb/e组小鼠及移植心均获长期存活（大于100天），C57BL/6一Balb/e组移植心存活时间8士0.8一6天，C57BL/6一Balb/e+CsA和C57BL/6一Balb/e+FK506组移植心存活时间分别为20.167士4.355天和17.333士2.066天，与C57BL/6一Balb/。组比较移植心存活时间都明显延长。Balb/c--Balb/