丙型肝炎病毒(HCV)感染在全世界估计约1亿7千万人，多数感染者呈慢性携带，且常进展为肝硬化和肝细胞癌。在我国约有3％的人感染。HCV经典的传播途径为经血液或血液制品传播，但1991年后献血员HCV的筛检已使输血后丙型肝炎大为减少。在发达国家HCV传播途径正在发生改变，儿童非输血、血液制品的丙肝日渐增多。母婴间宫内、分娩时及产后感染已成为当前及今后研究的重要问题。现研究证实HCV可经胎盘引起胎儿感染，宫内感染是HCV传播的一条重要途径。但目前的研究多数为流行病学调查及分子生物学研究，关于HCV如何在母婴间进行传播的具体机制研究报道甚少。 HCV经胎盘感染胎儿必须首先突破胎盘屏障的第一道防线——滋养层细胞。国外近年来离体实验研究发现人类免疫缺陷病毒(HIV)、流感A病毒、猫感染性腹膜炎病毒、柯萨奇病毒、登革热病毒等许多病毒感染过程中存在抗体依赖的病毒感染增强作用(ADE)，HIV还可通过ADE作用感染胎盘。在HCV感染过程中是否也存在ADE作用，HCV如何突破胎盘屏障感染胎儿，是否也具有与以上病毒相似的机制，目前尚未见报道。 为探讨HCV母婴传播的可能机制本研究进行了如下工作： 一、胎盘滋养层细胞的分离培养：滋养层细胞的分离培养实验参照国内外相关 第四军医大学硕士学位论文 摘要 文献并力U以改迷采月胰蛋白酶消化法消f 月胎盘绒毛组织，制成单细胞悬液， 以 35y及 45y两层 Percol密度梯度分离W细胞悬液，FX椭懈 赧细赃 陌养。貌疫荧光染色及透射电镜观窟证实，改朗的分离聊匕方法得到了 较高纯度的滋养层细胞，为辽卜一步探讨HCV 4iuAd＄的0奠定了细胞学实验旧乙础。 H、滋养层细胞免疫球蛋白k受体（IgG FCR）的档沏dM定：IgG FCR的存 在颜蛤过ADE作用感染细胞的必要条件之广，因此，洲究通朋蜘匕染色 御u滋枯细趾k Y Rill（CD16）勺表达，结跟示M台盘滋耗细鹏面有 FCR Ill（CDI6）表达，并且在月台盘绒 织中FC Y Rill（CD16）仅分布于胎盘屏障的最 外层，即滋耗…，体外分离培养的滋耗…IJ到 FCRlll（CDI6）表 达，从而为进—步探讨HCV ＃4U％J＆iHI中是否可E巳寺在ADE iguAI＆fjt了免疫学实 — —。 H、HCV对滋耗细胞的感染实验 用mV阳帖b虹清直接感染细胞更书臼瓦自然 感染的状态，直接感染法是目前研究＊V感染细胞的终方法。本实验中以 HCV RNA 阳性血清对分离纯4ed的滋养层）感染试验，收集感染后不同时间的细 鹏扦清及细胞爬片。应用定比及定量盯－PCR ＆jr＄憾朗细胞培协清中HCV RNA均为阳性；创电镜观察HCV感轭滋耗细胞的超微结构驰了类｛赠病毒 科病毒感染后的改变，主要表现为溶酶体大量增生，粗面内质网增生，脂滴减少， 出现空邯结构，并可0病毒样颗粒。间舱疫荧光法桂沏［］发现感躯的滋养 层 中可见 HCV NS。的表达，激光共聚焦湿微镜观窟可见 HCV NS；主要定位于核周。 本实舱釉抑实 HCV T以感染体夕卜吉养的滋摊蛐，肺可能因此极HCV 的母婴传播，但HCV感染后滋养层细胞中的病毒祥颗粒尚有待免疫电镜、原位杂交 等方法的证实，HCy能否在滋耗细胞中驯扑生有感染性的病砌粒尚在进一 步研究中．