竹叶黄酮的提取分离及抑菌效果研究

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竹叶中的黄酮类物质是一种天然生理活性成分,具有抑菌、抗自由基、抗氧化、杀虫、抗肿瘤、抗衰老、降血脂和血胆固醇美白等诸多生物活性。本文采用溶剂浸提、大孔树脂吸附分离等技术提取分离竹叶黄酮,并将其应用于豆浆的防腐保鲜,为天然食品保鲜剂的制备和豆制品的保鲜提供依据。以溶剂热回流法提取竹叶黄酮,采用正交试验法对提取工艺进行优化。考察了提取方式、原料粒度、溶剂种类及浓度、固液比、提取温度和时间等因素对竹叶黄酮提取率的影响。实验结果表明,溶剂热回流提取法所得黄酮提取率高于超声波、渗漉及冷浸法,而原料粒度对提取率影响不大。溶剂热回流提取的最佳工艺条件为,以60%(体积浓度,下同)乙醇水溶液按固液比1:16(g:ml,下同)、于70℃下提取三次,时间分别是2.5h、1.5h、1.0h,此时竹叶黄酮的提取率为98.06%,产品中竹叶黄酮的含量达14.87%。大孔树脂静态吸附实验结果表明:AB-8型大孔树脂对竹叶黄酮具有较高的吸附选择性和良好的脱附性能,树脂对竹叶黄酮的吸附量达20.64mg/g;Freundlich方程可较好地描述竹叶黄酮在AB-8树脂上的吸附平衡;吸附自由能变G<0,熵变S>0,吸附为自发的熵增过程,升高温度有利于吸附分离。焓变H为13.45kJ/mol,在氢键键能范围内,说明AB-8树脂对竹叶黄酮分子的吸附是以氢键形式发生的物理吸附。动力学研究表明,吸附过程符合二级动力学方程,颗粒外的液膜扩散是决定吸附速率的主要步骤。大孔树脂动态吸附-解吸实验结果表明:AB-8型大孔树脂对竹叶黄酮的动态吸附效果最好,黄酮浓度为1.0mg/ml的竹叶水提液直接上柱,流速为1BV/h,高径比为3.3:1,树脂对竹叶黄酮的吸附量达19.56mg/g;采用10%、20%、30%、40%的乙醇水溶液对吸附后的树脂柱进行梯度洗脱,产品的收率为22.11%,纯度达34.35%;以3.27BV的30%乙醇水溶液在1BV/h下对吸附后的树脂柱洗脱时,洗脱率为71.42%,产品纯度达到35.16%、收率为24.88%。将洗脱液烘干,醇溶得竹叶黄酮溶液,经HPLC-MS检测出分离得到的产物中含有四种黄酮类物质,分别为荭草苷或异荭草苷、芦丁、异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷和槲皮素-3-O-β-D-glu(1-2)-α-L-鼠李糖苷。最后采用平板计数法研究了竹叶黄酮(BLF)对几种常见食源菌(大肠杆菌,金黄色葡萄球菌,酵母菌和β-嗜碱芽孢杆菌)的抑菌效果,确定其最小抑菌浓度(MIC)和对豆浆的防腐保鲜效果。结果表明,竹叶黄酮对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、β-嗜碱芽孢杆菌有显著抑制作用,其MIC分别为0.029mg/ml、0.0180mg/ml、0.0700mg/ml,而对酵母菌无明显的抑制作用;4℃时添加0.01%BLF对豆浆的保鲜效果较好,而30℃时BLF的最佳用量为0.015%;感官评定结果显示,添加0.01%-0.015%的BLF对豆浆的色泽和风味均无不良影响,且可使保质期延长6h;香兰素与BLF对豆浆的保鲜效果具有一定的协同作用,30℃时添加0.015%的BLF与香兰素质量比为4:1的复合保鲜剂,可使豆浆的保质期延长8h。
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