【摘 要】
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黑曲霉NRRL 3135中的分泌型植酸酶A是一种糖蛋白,能水解植酸生成正磷酸盐。它属于大分子量组氨酸酸性磷酸酯酶,而且具有耐酸性和高活性,因此可以作用饲料工业用酶来促进动物
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黑曲霉NRRL 3135中的分泌型植酸酶A是一种糖蛋白,能水解植酸生成正磷酸盐。它属于大分子量组氨酸酸性磷酸酯酶,而且具有耐酸性和高活性,因此可以作用饲料工业用酶来促进动物体内植酸的分解,降低有机磷对环境的污染。但是由于热稳定性问题,极大限制了黑曲霉NRRL 3135中植酸酶A在工业生产中的应用。毕赤酵母GS115作为表达异源蛋白的宿主已经被广泛的应用,并且表达的蛋白质都被糖基化,而且热稳定性有所提高。我们将一段含有大约1.4kb的phyA的基因正确插入到载体pPICZaA并且整合到毕赤酵母GS115染色体中,然后用甲醇进行诱导表达。获得了分子量为95kD糖基化重组植酸酶。酶学性质测定表明该重组植酸酶的活力为100U/mg左右,最适作用温度55℃,最适pH5.5。热失活试验表明该重组植酸酶在85℃加热10分钟仍然有48%的活性剩余。可见在毕赤酵母GS-115中表达的重组植酸酶的热稳定性有所提高。
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