二穗短柄草(Brachypodium distachyon)是一种温带禾本科植物,其植株矮小自花授粉、生活周期短、生长条件简单、基因组小、易于进行遗传转化等,是温带禾本科植物功能基因组学研究的理想模式植物。随着二穗短柄草基因组测序及注释的正式完成,对基因功能的研究己成为重点,研究基因功能最直接和有效的方法是构建二穗短柄草突变体库。T-DNA的插入是突变体库构建的重要方法之一。本研究利用已完成全基因租序列测定的二穗短柄草BD21,采用农杆菌介导T-DNA插入法获得突变体库,以对其近缘作物小麦、玉米、水稻、牧草、草坪草等的研究起到应有的作用。主要结果如下1.二穗短柄草高效离体再生体系的建立试验主要以二穗短柄草三个品系BD21, BD21-3和BD018幼胚为外植体,研究了胚的大小对愈伤组织的诱导和再生的影响。选取BDB21, BD21-3, BDR018三个品系的未成熟胚,将其分为小于0.3mm、0.3mm～0.5mm和大于0.5mm三个等级进行诱导培养,结果发现,三个品系中大小介于0.3mm～0.5mmm之间的未成熟胚诱导率均较高,分别为88.6%、87.6%、74.2%,其中BD018愈伤的再生能力最强。2.二穗短柄草遗传转化体系的优化选取BD018为试验材料,选取不同菌株AGL0、AGL1、EHA105. LBA4404(均含有质粒pDM805)侵染,结果表明AGL1的侵染效果较好。对于抗性筛选标记,hpt基因筛选效果显著好于bar基因,在一定程度上节约了突变体库的构建成本。3.选取BD21为试验材料,利用T-DNA插入法构建突变体库,已成功共获得3000多个独立转化株系,预期获得15000个独立转化株系。