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肝炎-心包积液综合征(Hepatitis Hydropericardium Syndrome,HHS)是由Ⅰ群禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus 4,FAdV-4)引起的主要侵害鸡的一种病毒性传染病。典型症状为3-9周龄鸡突然死亡,并伴随心包积液、包涵体肝炎,发病率和死亡率均高。1987年在巴基斯坦的卡拉奇附近的安卡拉地区首次报道本病,随后在墨西哥、印度、俄罗斯、韩国、日本等国家均有该病发生的报道。2015年以来,由FAdV-4新基因型导致的HHS在我国山东、河南、江苏等地出现流行,死亡率高达80%,给我国养禽业带来了较大的经济损失。目前,疫苗免疫仍是防控禽腺病毒感染的重要手段,但市场还没有预防该病较正规商品化的疫苗,研究针对FAdV-4新基因型的疫苗将有助于防控HHS在中国的流行。弱毒活疫苗能够模拟病毒侵染机体的全过程,能够诱导机体产生包括黏膜免疫反应在内的各级免疫反应。为了研发用于HHS防控的FAdV-4弱毒活疫苗,本研究对分离自健康鸡的FAdV-4毒株ON1的生物学特性和体外增殖规律以及对FAdV-4中国流行株强毒攻击的保护效果进行了研究,以期为进一步研发用于防控HHS的弱毒活疫苗奠定基础。研究内容包括以下2个方面:1.FAdV-4弱毒株ON1的生物学特性研究为了解FAdV-4毒株ON1的生物学特性,利用SYBR Green I实时荧光定量PCR和病毒滴度测定方法,研究该毒株在鸡肝癌上皮细胞系(LMH)中的生长特性和增殖规律。结果显示FAdV-4毒株ON1在LMH中能够很好增殖,呈现典型的腺病毒感染细胞病变,不同时间点的病毒滴度与病毒基因组拷贝数呈正相关,病毒感染后72 h时滴度最高,且培养上清中亦含有大量成熟的病毒粒子;将FAdV-4毒株ON1经口感染7日龄SPF鸡,所有感染鸡临床没有任何症状;ON1感染鸡在感染后12小时可从泄殖腔分离出病毒,2周的观察期内可持续检测到排毒;采集感染鸡的组织器官制备病理切片进行HE染色,结果显示ON1感染鸡各组织器官与未感染对照鸡没有明显差异。证明毒株ON1临床上对鸡不具有致病性。2.FAdV-4弱毒株ON1的免疫原性和免疫效力为评价FAdV-4毒株ON1的免疫原性,本试验利用鸡肝癌细胞系(LMH)培养FAdV-4毒株ON1,将60只7日龄SPF鸡随机分为两组,经口服感染FAdV-4 ON1毒株,免疫后在不同时间点检测ON1毒株免疫鸡的FAdV-4特异性抗体水平,分析其免疫原性,同时采集泄殖腔拭子检测免疫鸡的排毒情况。结果显示,ON1免疫鸡均产生FAdV-4特异性抗体和中和抗体,抗体水平在免疫后2周达到高峰期,并维持较长时间。ON1免疫鸡在感染后2周的观察期内持续排毒,病毒的排毒持续期与诱导的抗体水平相一致。在免疫后2周使用FAdV-4中国流行强毒株攻毒,以评价弱毒疫苗的免疫效力。结果显示,ON1免疫后2周用FAdV-4中国流行株强毒株攻毒,ON1免疫可以对FAdV-4中国流行强毒株提供75%保护,而对照组鸡全部死亡。结果表明FAdV-4 ON1毒株免疫可以对FAdV-4中国流行强毒株的攻击提供部分保护作用。