紫花苜蓿(MedicagosativaL.下简称苜蓿)是我国第一大栽培牧草，重要的饲料蛋白源，目前栽培面积约为280万hm2。青贮是保存苜蓿鲜度和营养的好方法。但苜蓿蛋白质含量高，糖含量低，青贮易失败。解决高效、低成本的苜蓿青贮技术对我国畜牧业的稳定发展和确保粮食安全具有重要意义。乳酸菌作为接种剂一直得到重视，但纯培养菌接种到未灭菌材料后效果不稳定，学术界一直对此有争论。因此本研究的目的是摆脱传统的纯培养，优化组合包括难培养微生物种在内的自然界多样的微生物，构建高效、稳定而抗逆性强的乳酸菌复合系，进而结合传统技术和现代分子生态学技术研究复合系对苜蓿青贮的促进效果及苜蓿发酵中的作用机理，以期为苜蓿青贮难题的解决和我国优质、高效青贮菌剂的开发提供理论依据和技术基础。本研究以pH降低迅速、稳定和L(+)—乳酸积累量多为指标，通过连续的限制性培养，从发酵饲料、青贮苜蓿及乳酸菌制剂中分别筛选出Al2、Ru2、Li6三组菌系。该三组菌系均pH下降迅速，各代之间pH值动态稳定；经GCMS测定结果，发酵液中含有较高的乙酸、乳酸，还有少量甲酸、丙酸等挥发性脂肪酸及丁二醇、乙酸乙酯、异丁醛、乙醛、乙酰胺等风味物质；在上述代谢产物中乙酸和乳酸占总代谢物的98％以上，尤其是L(+)—乳酸的比率高达60～70％。用传统的纯化培养技术、变性梯度凝胶电泳(DGGE)以及16SrDNA克隆文库等分子生态学技术相结合分析了Al2、Ru2这2组菌系的组成多样性，结果由Al2复合系检测出7株乳酸杆菌，其中3株可培养，4株未能分离；Ru2复合系由2种可培养，1种未能分离的乳杆菌组成。通过16SrDNA的DGGE和克隆文库分析证明，Al2中的优势菌为Lactobacillusplantarum和Lactobacilluskimchii，Ru2中的优势菌为Lactobacillusplantarum和Lactobacilluscasei。将Al2和Ru2复合系接种到苜蓿的发酵实验证明，2复合系均能比不接菌对照明显加快pH下降，提高乳酸含量，降低氨态氮的产生而明显改善青贮饲料的发酵品质；追踪接种菌群的DGGE图谱显示，复合系中的主要菌株稳定定殖在发酵物中成为优势菌，接种处理显著抑制杂菌繁殖。进一步将Al2复合系、各分离单一菌株和分离菌株的人工组合接种到苜蓿的比较实验显示，各分离菌株及人工组合在促进pH值降低，提高乳酸生成，降低氨态氮和抑制杂菌方面的效果不如复合系，证明了无灭菌环境中复合系接菌效果具有优越性。