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目的:研究维生素A对碘过量小鼠甲状腺细胞凋亡及其相关基因表达的影响。
方法:选用出生3周,体重在10g-12g的昆明种小鼠270只,按体重随机分为6组,每组45只,雌雄各半,用合成饲料喂养。(1)正常对照组(NI):(维生素A 4000 IU/kg,碘50μg/L);(2)高碘组(HI):(维生素A 4000IU/kg,碘3000μg/L);(3)低维生素A组(LVA):(维生素A OIU/kg,碘50μg/L);(4)高碘低维生素A组(HI+LVA):(维生素A OIU/kg,碘3000μg/L);(5)高碘补维生素A1组(HI+VA1):(维生素A 8000IU/kg,碘3000μg/L);(6)高碘补维生素A2组(HI+VA2):(维生素A 160001U/kg,碘3000μg/L)。通过控制合成饲料中维生素A的含量和饮用不同浓度碘酸钾的去离子水。分别观察1、3、6个月时,小鼠甲状腺绝对质量与相对质量,甲状腺组织形态学,血清甲状腺激素水平和血清抗氧化能力的改变;采用电镜和原位末端标记法(TUNEL法)进行细胞凋亡的检测,免疫组化和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR法)对甲状腺细胞凋亡相关基因Fas、FasL、Bcl-2进行蛋白和基因半定量的测定。
结果:1.3个月、6个月时HI组小鼠甲状腺绝对质量和相对质量显著高于对照组;HI+VA组小鼠的绝对质量和相对质量6个月时显著低于HI+LVA组,略轻于HI组。2.光镜下甲状腺肿发生比率3个月时,HI组、HI+LVA组、HI+VA2组甲肿率均高于NI组,有统计学意义;6个月时,除LVA组,其余各组甲肿率均高于NI组,有统计学意义。3.3月时,光镜结果HI组小鼠出现高碘性甲状腺肿,电镜结果显示有凋亡细胞的出现。4.1个月时,血清T<,4>水平HI各组与NI组相比差异均有统计学意义;6个月时,HI+VA组与HI组和HI+LVA组相比较差异均有统计学意义。5.小鼠血清GSH-Px活性各组相比差异无统计学意义。HI组SOD活性3、6个月时显著高于NI组;HI+VA组6个月时显著低于HI组。6个月时HI组、HI+LVA组的MDA活性显著高于NI组;HI+VA组显著低于HI组、HI+LVA组接近NI组水平。6.TUNEL法检测凋亡指数随着月龄的增长呈逐渐上升的趋势,1个月时各组之间无统计学意义;3个月时,HI组、HI+LVA组、HI+VA2组均高于NI组,有统计学意义;6个月时,除HI+VA1组外各组都高于高于NI组,有统计学意义。7.免疫组化结果显示:三个阶段,HI组Fas和FasL蛋白阳性表达面密度普遍高于NI组,3个月、6个月时Fas蛋白显著高于NI组;HI+VA两组的Fas和FasL蛋白阳性表达3、6个月时低于HI组。1个月时,HI组的Bcl-2蛋白表达略高于NI组,但3、6个月时,却低于NI组;3、6个月时,HI+VA两组Bcl-2蛋白表达略高于HI组,低于NI组;6个月时,各实验组与NI组相比均有统计学意义。8.RT-PCR结果显示:Fas、FasLmRNA三个阶段HI组普遍高于NI组,无明显差异;6个月时,HI+VA组FasmRNA的表达低于HI组,已经接近于NI组;HI+LVA组Fas、FasLmRNA的表达1、3个月时没有差异,到6个月时略高于HI组,但无统计学意义。Bcl-2mRNA三个阶段无明显差异,6个月时Bcl-2mRNA的表达略高于前两个阶段。
结论:1.高碘可以引起小鼠甲状腺胶质潴留性肿大,造成甲状腺滤泡上皮细胞损伤,补充适量的维生素A可以部分拮抗高碘造成的影响。合成饲料中补充维生素A能使高碘小鼠的甲状腺质量和甲肿率降低,但不足以恢复到适碘组水平,说明补充维生素A对高碘造成的甲状腺肿有一定的回复作用。2.HI+VA组在甲状腺激素水平的改善上作用较弱,6个月时T<,3>水平有改善。3.HI组小鼠抗氧化能力虽然呈代偿性升高,但不能克服自由基对甲状腺组织的损伤,而补充维生素A在一定程度上降低了自由基对甲状腺组织的损伤,起到了保护作用。4.HI组小鼠甲状腺细胞凋亡基因及其蛋白Fas、FasL升高,3、6个月时Bcl-2蛋白表达降低,HI+VA组基因的表达升高或降低的趋势有所缓解,补充维生素A在一定程度上调控细胞凋亡的过程。