肠康方由熟地黄、菟丝子、黄连、白芍等药味组成,来源于全国名老中医多年临床经验方,具有交通心肾,调和肝脾之功效,临床上用于治疗腹泻型肠易激综合征。前期60例临床研究表明,肠康方治疗肠易激综合征总有效率达85%,该方的作用机制一方面通过调节肠神经递质SERT来改善肠易激综合征的内脏高敏感,另一方面透过血脑屏障对脑中神经递质SERT进行调节,在此研究基础上获得了国家专利授权(专利号:ZL201110336380.2)。然而该方在临床上一直以汤剂使用,制备、储存、运输、服用极不方便,限制了该方的使用范围,为了让该方服务更多的患者,本课题在江苏省科技支撑计划-社会发展项目(编号:BE2012776)资助下,运用现代制剂技术和质量控制方法,将肠康方制成了工艺稳定、质量可控,安全有效的现代中药制剂。本研究内容主要包括文献研究、制备工艺研究、质量标准研究及加速稳定性研究。1文献研究本课题以中医药理论为指导,全面阐述了其立题依据及意义,同时从理化性质、药理药效等方面对处方中各味药进行了归纳与总结。2制备工艺研究(1)提取工艺一方面,根据临床用药经验设计了传统水提取工艺;另一方面,根据处方各药味化学成分的理化性质及药理作用,设计了多单元提取技术的耦合应用于活性组分的提取的现代提取工艺。对两种提取工艺路线进行了优化,并运用合适的药效学模型对它们的药效进行了评价。传统提取工艺优化:以金丝桃苷、盐酸小檗碱、芍药苷、升麻素苷含量及出膏率为指标,对影响提取工艺的主要因素即溶剂倍数、提取时间、提取次数,按照4因素3水平进行L9(34)正交设计,优选出传统提取工艺的最佳水提工艺为:药材加10倍量水,提取3次,每次1小时。现代提取工艺优化:(1)挥发油的提取:采用水蒸气蒸馏法提取防风药材的挥发油,对药材挥发油提取时间进行了考察,确定防风挥发油提取11小时,挥发油基本提尽,挥发油量不再增加。(2)脂溶性活性成分的提取:以金丝桃苷、表儿茶素含量为指标,对影响菟丝子、金荞麦提取工艺的主要因素即醇浓度、溶剂倍数、提取时间、提取次数,按照4因素3水平进行L9(34)正交设计,优选出最佳醇提工艺为:药材加6倍量45%乙醇,提取3次,每次1.5小时。(3)水溶性活性成分的提取:以芍药苷、盐酸小檗碱及出膏率为考察指标,对影响提取工艺的主要因素即溶剂倍数、提取时间、提取次数,按照4因素3水平进行L9(34)正交设计,优选出熟地黄、黄连等药材和防风、菟丝子、金荞麦提取后药渣合并水提取的最佳水提工艺为:药材加10倍量水,回流提取3次,每次1小时。两种优化的提取工艺药效学评价:通过小鼠肠推进实验、小鼠镇痛实验和大鼠IBS模型对传统提取工艺和现代提取工艺研究发现,两种提取工艺制备的提取物药效没有显著性差异,因此选取工艺程序更简单,提取溶剂安全、价格低廉的传统水提取工艺作为最佳提取方法。(2)纯化、浓缩、干燥工艺纯化工艺研究中,以去杂率和指标成分的保留为指标,采用单因素试验考察了不同醇沉浓度的纯化效果,确定了最佳醇沉工艺条件为提取液浓缩至相对密度1.13(70 ℃)的清膏,加95%乙醇醇沉,使含醇量85%,通过对醇沉产物的药效学研究发现醇沉后上清液和沉淀均有较好的活性,为了防止活性成分的流失,最终决定不做醇沉处理。浓缩工艺研究中,比较了真空度-0.08～-0.09 Mpa下不同温度对指标成分的影响,最终确定了水提液在60～70℃下减压浓缩至相对密度1.25～1.30(70℃测)的清膏较为适宜。干燥工艺研究中,比较了不同减压干燥温度和干燥时间对指标成分和浸膏含水量的影响,确定干燥工艺参数为:干燥温度60℃,真空度-0.08～-0.09 Mpa,干燥24小时。(3)成型工艺研究对制剂成型工艺中辅料的种类、用量、干法制粒的参数进行了考察,确定了制粒的最适宜工艺为:以糊精为辅料,用量为物料总量的40%,与浸膏粉混合均匀,采用干法制粒,主要参数为:轧辊压力60～70Kg/cm2,轧辊转速15～20转/分,加料速度为10～20转/分。3质量标准研究为使本品质量具有可控性,本文对肠康颗粒进行了定性、定量研究,同时参照2010版中国药典一部颗粒剂项下的有关规定进行了常规项目检查,建立了制剂的质量标准。定性研究中研究了方中7味药的定性方法,最终确定了重现性好、无阴性干扰的菟丝子、黄连、防风、白芍药材的定性分析方法。定量研究中建立了制剂中金丝桃苷和芍药苷的HPLC含量测定方法,根据三批中试产品的测定结果,暂定每袋本品含金丝桃苷不得低于2.34mg,含芍药苷不得低于61.14 mg。4稳定性研究为了考察药品的稳定性,采用加速试验法对中试产品的性状、鉴别、含量等开展了稳定性研究。结果证明各项指标均在合格范围内,说明本品在此包装条件下基本上是稳定的。总之,本项目优化了肠康颗粒提取、浓缩、干燥和成型工艺参数,制定了制剂质量标准,为将该方开发成携带服用方便、工艺可行、质量可控的现代中药制剂提供了实验依据。