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随着食品安全现场快速检测需求的日益增加,环介导等温扩增（LAMP）技术逐渐成为食源性微生物检测的研究热点。免提取LAMP技术可以缩短检测时间,避免核酸损失和交叉污染,更符合现场快速检测的需求。链置换DNA聚合酶（如Bst DNA聚合酶）是LAMP反应中最关键的组分,在用于现场快速检测中,野生型Bst DNA聚合酶耐受抑制剂的能力还有待提高。本文采用基因工程技术对Bst DNA聚合酶进行分子改造,研究改造体StoL3Bst的酶学性质并优化其LAMP反应条件,实现其在血液中非洲猪瘟病毒（ASFV）的免提取检测。本文的主要研究内容及相关结论如下:（1）Bst DNA聚合酶的改造与表达。将Bst DNA聚合酶大片段（Bst LF）分别与双链DNA结合蛋白Sso7d、Sto7d按照不同的顺序用不同长度的连接子连接,设计并成功构建了重组表达载体,实现了这些改造体在大肠杆菌中重组表达。筛选出催化LAMP性能较好的改造体StoL3Bst,优化了其诱导表达条件:诱导温度为18℃、诱导时间为12 h、诱导剂IPTG的浓度为0.05 mmol/L。采用镍离子亲和层析纯化制备了StoL3Bst,其酶活浓度为9.20×10~3U/m L。（2）StoL3Bst的酶学性质研究。将StoL3Bst用于星状病毒的LAMP检测体系,优化了反应缓冲液组成和浓度、引物和荧光染料浓度、酶用量等反应体系组成,LAMP反应温度和p H分别确定为64℃和p H 9.0。StoL3Bst发挥聚合酶活性的最适反应温度为55.8℃、最适反应p H为9.0。StoL3Bst具有良好的热稳定性和p H稳定性,而且,StoL3Bst对于常见核酸扩增抑制剂的耐受能力比Bst LF更强,分别可以耐受100 mmol/L Na Cl、1 mol/L尿素、0.2 U/μL肝素钠、7%（v/v）乙醇、0.18‰（w/v）SDS和至少8%（v/v）的全血。（3）StoL3Bst用于ASFV的LAMP检测。对于预提取核酸样本,StoL3Bst和Bst LF体系具有较好的特异性和重复性,最低检测限均为3000 copies/μL,商业产品NEB Bst 3.0在说明书条件下检测特异性差。在对96个基因组DNA样本的检测中,StoL3Bst和Bst LF体系的灵敏度和特异度均为100%,与q PCR法相当。对于ASFV猪血浆免提取样本,StoL3Bst体系的时间阈值（7.07 min）远低于Bst LF体系（13.08 min）。在含终浓度为0.5%（v/v）的猪全血时,StoL3Bst体系的最低检测限是Bst LF体系的四分之一,而Taq Man探针法q PCR体系只能耐受0.05%（v/v）的猪全血。在对96个全血样本的检测中,StoL3Bst和Bst LF体系的特异度均为100%,且StoL3Bst体系的灵敏度（93.8%）远大于Bst LF体系（58.3%）。