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目的:观察来源于ES的、去LIF类胚体阶段nestin阳性前体细胞于C6胶质瘤模型原位及对侧位植入后针对胶质瘤细胞的追踪及定向迁移现象,与其他学者的不同种类或同类而不同分化阶段的干细胞的趋化现象比较,结合该前体细胞体外transwell趋化实验就迁移机制做初步探讨并为下一步以该前体细胞为载体的基因治疗作准备。 方法:首先培养用于迁移实验的细胞,即源于类胚体的nestin阳性前体细胞。复苏小鼠ES细胞,传2代后消化成单细胞,一组于分化前对ES进行标志抗原SSEA-1染色鉴定;另一组用撤除LIF的ES培养基+10%FBS培养10天,细胞由接种时的单细胞长成悬浮的圆形细胞团,即类胚体。然后将EB细胞胰酶消化并转移到普通培养皿中,贴壁生长2天,进行SSEA-1抗体免疫组化染色,及ES标志转录因子Oct-4和类胚体标志基因nestin的RT-PCR检测。以293T为包装细胞制备GFP-慢病毒,转染ES细胞,另转染NIH3T3细胞作为实验对照组;荧光染料PKH26标记C6胶质瘤细胞。用荧光倒置显微镜观察组织冰冻切片的荧光强度并检测细胞活力。成功完成细胞标记后进行体内实验。在肿瘤原位以及对侧半球移植入nestin阳性的类胚体细胞,通过跟踪GFP荧光细胞,观察研究该细胞针对肿瘤的迁移表现,相同方法观察对照组3T3细胞是否向胶质瘤定向迁移;在transwell趋化迁移系统中实施体外实验,对比前体细胞针对C6条件培养基、培养基及HBSS的过膜细胞数。 结果:分化12天后的类胚体细胞nestin染色阳性明显,RT-PCR检测nestin阳性,Oct4弱阳性。在用带绿色荧光的GFP-慢病毒转染ES细胞及NIH3T3细胞、红色荧光染料PKH26标记C6胶质瘤细胞后,荧光显微镜下见ES细胞、NIH3T3细胞发出亮绿色荧光,抗生素筛选后,大于98%的细胞携带GFP。同样有大于98%的C6胶质瘤细胞被染上亮红色荧光,三种带标记的细胞,标记制备成功。分组移植后,前体细胞肿瘤原位移植组见到GFP荧光细胞进入肿瘤后成弥散分布于肿瘤体内,对照组3T3细胞未见于胶质瘤原位弥散。对侧移植前体细胞组