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EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)为嗜淋巴细胞病毒属的DNA肿瘤病毒,EBV感染与部分胃癌发生的关系已经确认,EBV相关胃癌(EBV-associated gastric carcinoma,EBVaGC)约占胃癌总数的10%。EBVaGC发生的表观遗传学机制的研究主要涉及EBV感染对抑癌基因启动子区甲基化的影响,以及EBV非编码RNA对宿主基因表达调控作用两个方面。目的明确EBV感染对Wnt抑制因子1(Wnt inhibitory factor-1,WIF1)编码基因启动子区甲基化以及EBV编码miRNA BART19-3p对WIF1表达的影响,为进一步探讨EBV抑制WIF1表达,进而异常激活Wnt原癌基因通路参与EBVaGC发生发展的作用机制提供实验基础。方法选取2种EBV阳性胃癌细胞系GT38、GT39和3种EBV阴性胃癌细胞系HGC-27、MKN-45、SGC7901作为研究对象,采用实时荧光定量PCR(Real time quantitative PCR,real time qPCR)检测上述细胞系WIF1表达水平,亚硫酸氢盐基因组测序法(Bisufite genomic sequencing,BGS)检测WIF1基因启动子区甲基化状态。并分别采用5-Aza-CdR、BART19-3p模拟物以及抑制物作用EBV阳性胃癌细胞系GT38和EBV阴性胃癌细胞系HGC-27,检测药物作用前后2种细胞系WIF1和β-catentin表达水平的变化以及细胞增殖情况。结果①BGS检测结果结果显示,5种胃癌细胞系WIF1启动子区均呈高甲基化状态,甲基化率均在85%以上。②real time qPCR结果显示,胃癌细胞系中WIF1表达普遍下调,以EBV阳性细胞系GT38和GT39下降更为明显;5-Aza-CdR作用后GT38和HGC-27两种细胞系WIF1表达均上调,其中HGC-27上调更为显著;同时,Western Blot显示两种细胞系β-catenin水平均下调。③EBV阴性细胞系HGC-27转染外源性BART19-3p模拟物后,WIF1表达进一步下调,β-catenin水平升高,细胞增殖率增加。④EBV阳性细胞GT38转染外源性BART19-3p抑制物后,WIF1表达水平升高,β-catenin表达水平下调,细胞生长抑制率增加。结论①EBV阴性和阳性细胞系中WIF1表达水平均较低,EBV阳性细胞系中表达缺失或下调情况更为明显,去甲基化试剂5-Aza-CdR处理可不同程度上调GT38及HGC-27细胞系WIF1表达,EBV阴性细胞系HGC-27上调更为明显。②外源性BART19-3p模拟物转染EBV阴性细胞系HGC-27可进一步抑制WIF1表达,抑制β-Catenin降解,促进其积聚。提示BART19-3p可拮抗WIF1对Wnt/β-catenin信号通路的抑制作用,进而在EBV相关肿瘤的发生发展中发挥作用。③外源性BART19-3p抑制物转染EBV阳性细胞系GT38可抑制EBV编码的BART19-3p的作用,WIF1表达上调,从而抑制β-catenin的积聚,进一步证明BART19-3p对WIF1的抑制作用。④尽管普遍认为EBV对宿主表观遗传学的影响主要为抑癌基因启动子区甲基化,但就WIF1而言,其编码miRNAs可能发挥主要作用。