背景:泛素(ubiquitin, Ub)是在真核细胞生物中普遍存在的一种具有高度保守性的蛋白质[1]。真核细胞蛋白质降解途径主要为泛素-蛋白酶体系统(Ubiquitin proteasome system,UPS),通过该蛋白酶体系统降解细胞内泛素化的蛋白质。相关研究表明细胞内大部分泛素化蛋白质通过UPS降解。泛素化是细胞维持对受环境刺激所产生蛋白质水平的基本调节方式。UPS是真核细胞内主要的蛋白质控系统,不仅可以高度选择及高效性的参与细胞内蛋白质转换,而且参与多种生理过程,包括细胞器的发生;细胞周期的增殖、分化、凋亡;基因转录;信号传导;抗原提呈;蛋白转运;DNA修复等[2、3]。随着对UPS的深入研究发现,细胞周期调控的重要分子p27是新近发现的一种CKI,其在刺激细胞分化和抑制细胞增殖等方面的重要作用越来越受到重视。同时研究发现p27蛋白降解与UPS有着密切的关系,在直肠癌、胆囊癌、乳腺癌等肿瘤组织中得到证实[4],但UPS对p27蛋白降解调节的机制尚不清楚。本实验通过免疫组织化学方法结合蛋白免疫印迹技术,检测肝细胞癌组织中Ub、p27蛋白的表达水平。同时观察Ub、p27蛋白在不同肝细胞癌病理分级之间表达的关系,探讨两者在肝细胞癌发生、发展中的关系和作用。目的:研究人肝细胞癌组织中泛素-蛋白酶体系统和p27蛋白的异常表达,及两者与肝细胞癌不同病理分级的关系及临床意义。试图分析UPS系统和p27蛋白低表达在肝细胞癌发生发展中的机制、作用和意义,以期为肝细胞癌的临床诊断、预后判断、治疗等各方面提供新的理论支持和帮助。方法:1.采用免疫组织化学法,分别检测人肝细胞癌不同病理分级组织中Ub和p27蛋白表达的情况,定性分析人肝细胞癌组织中Ub和p27蛋白的异常表达情况与临床病理分级之间的相关性;2.采用蛋白免疫印迹技术,分别检测人肝细胞癌不同病理分级组织中Ub和p27蛋白表达量的情况,结合免疫组织化学方法检测的结果,定性和半定量的分析人肝细胞癌组织中Ub和p27蛋白的异常表达情况与临床病理分级之间的相关性;3.采用胞浆和胞核蛋白分离技术,分别检测肝细胞癌不同病理分级组织的胞核及胞浆中Ub和p27蛋白的表达,进一步分析Ub和p27作用的部位和意义。结果:1.免疫组织化学检测结果示:肝细胞癌不同病理分级组织中均有Ub、p27蛋白的表达,Ub蛋白定位于细胞核及细胞浆,其表达随分化程度降低反而增高(P<0.05);p27蛋白主要定位于细胞核,其表达随分化程度降低而降低(P<0.05);分析Ub和p27蛋白的表达与病理分级有明显的相关性(P<0.05)。2.蛋白免疫印迹检测结果示:肝细胞癌组织Ub蛋白表达量随分化程度降低反而增高,各组织组间差异有统计学意义(P<0.05);P27蛋白表达量在低分化组均低于高分化和中分化组,组织组间差异有统计学意义(P<0.05),但高分化和中分化组织组间无明显差异(P>0.05);3.采用胞浆和胞核分离技术,分别检测两者蛋白在胞浆和胞核中表达情况。实验结果显示:不同病理分级组织细胞胞浆中可检测到Ub和p27蛋白的表达,表达量与不同分化程度组织间差异无统计学意义(P>0.05),但较总蛋白中两者蛋白表达量,胞浆中两者蛋白表达量明显减少;肝细胞癌组织胞核中,Ub蛋白表达量随分化程度降低反而增高,各组织组间差异有统计学意义(P<0.05);而肝细胞癌组织胞核中,p27蛋白表达随分化程度降低而降低,各细胞组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在肝细胞癌不同病理分级组织中,Ub蛋白表达随分化程度降低反而增高,而p27蛋白表达随分化程度降低而降低,提示UPS系统和p27蛋白的异常表达之间可能存在密切关系,并可能在肝细胞癌的发生发展发挥重要作用。