[目的]:通过体外、体内实验研究CD133+肝癌细胞的生物学特征;同时体外模拟缺氧微环境,研究缺氧对CD133+肝癌细胞生物学行为的影响。[方法]:1、以CD133作为表面标志物,通过免疫磁珠分选技术从人肝癌Huh7细胞系中分选出CD133+细胞和CD133-细胞;2、流式细胞术检测分选前Huh7对照组(N组)、CD133+组及CD133-组细胞CD133表达量,对三组细胞分别进行细胞培养;3、MTT法绘制分选前Huh7对照组(N组)、CD133+组及CD133-组细胞生长曲线;4、克隆形成实验检测分选前Huh7对照组(N组)、CD133+组及CD133-组细胞克隆能力;5、运用氯化钴(CoCl2)化学模拟肿瘤缺氧微环境,MTT法检测分选前Huh7对照组(N组)、CD133+组及CD133-组细胞缺氧耐受能力;6、MTT法分别检测常氧和缺氧条件下分选前Huh7对照组(N组)、CD133+组及CD133-组细胞黏附性;7、MTT法分别检测常氧、缺氧条件下分选前Huh7对照组(N组)、CD133+组及CD133-组细胞对化疗药物顺铂治疗的抵抗性;8、流式细胞术分别检测常氧、缺氧条件下分选前Huh7对照组(N组)、CD133+组及CD133-组细胞凋亡、坏死及细胞周期情况;9、将分选前Huh7对照组(N组)、CD133+组及CD133-组细胞分别接种于裸鼠皮下,观察肿瘤生长情况;并给予顺铂治疗,观察肿瘤变化;10、使用Excel2007整理数据,采取SPSS22.0软件对其进行统计学分析,计量资料采用x±s表示。两组计量资料之间比较,服从正态分布的数据采取T检验,不服从正态分布的数据采取Wilcoxon符号秩和检验;多组计量资料之间的比较,服从正态分布、方差齐的数据使用方差分析,不服从正态分布或方差不齐的数据使用Kruskal-Wallis H检验。重复测量资料之间的比较,使用重复测量方差分析。显著性水准α =0.05。[结果]:1、流式细胞仪检测未分选Huh7细胞中CD133表达量为42.99%、CD133+组细胞CD133表达量为91.21%、CD133-组细胞CD133表达量为10.23%。分选前后差异有统计学意义(t=12.50;P=0.0002)。后续培养过程中各组细胞生长状态良好,细胞活性基本不受影响;2、生长曲线显示CD133+肝癌细胞活力、增殖能力明显强于CD133-肝癌细胞(p=0.029);3、细胞克隆实验显示CD133+肝癌细胞形成细胞团个数最多,克隆形成能力强于CD133-肝癌细胞(p=0.000009);4、随着氯化钴(CoCl2)浓度增加,细胞增殖受到抑制。相同浓度氯化钴(CoCl2)作用下,CD133+肝癌细胞存活率高于CD133-肝肝癌细胞(p=0.00346);5、随化疗药物顺铂作用浓度增加,细胞增殖受到抑制。常氧条件下,CD133+肝癌细胞对顺铂治疗的抵抗性强于CD133-肝癌细胞(p=0.00403)。缺氧条件下,CD133+肝癌细胞对顺铂治疗的敏感性强于CD133-肝癌细胞(p=0.0025);6、缺氧条件下细胞凋亡、坏死率降低。CD133+肝癌细胞凋亡、坏死率在常氧、缺氧情况下均低于CD133-肝癌细胞;7、常氧状态下,CD133+肝癌细胞中54.92%的细胞处于G0/G1期,缺氧条件下CD133+肝癌细胞出现G0/G1期细胞数量减少,S期、G2/M期细胞数量增多;常氧状态下,CD133-肝癌细胞中42.65%的细胞处于G0/G1期,缺氧条件下CD133-肝癌细胞G0/G1期及G2/M期细胞数量增多、S期细胞数量减少;8、氯化钴(CoCl2)诱导缺氧24小时后,细胞黏附性增加(p=5.16*10-11),CD133+组和CD133-组的细胞黏附性差异不大(p=0.89401);9、各组细胞在裸鼠皮下均形成肿瘤,顺铂治疗组裸鼠体重低于对照组、肿瘤体积缩小(p=0.005),顺铂对CD133+组裸鼠的肿瘤抑制率最高。[结论]:1、以CD133作为表面标志物,运用免疫磁珠分选技术可获得大量纯度较高的CD133+肝癌细胞,且分选后细胞生长状态良好、细胞活力受影响较小,能成功传代、冻存与复苏,可以满足后续实验细胞需求;2、同CD133-肝癌细胞相比较,CD133+肝癌细胞具有更强的细胞活性、体外增殖能力、克隆形成能力、缺氧耐受能力、抗凋亡能力以及常氧条件下对顺铂治疗的抵抗性,与肿瘤干细胞部分特性相符。但CD133不适于做肝癌肝细胞的单独分选标志;3、缺氧可促进CD133+肝癌细胞与基底膜和细胞外基质黏附,同时缺氧可降低CD133+肝癌细胞的凋亡、坏死,提示改善缺氧微环境有望成为治疗肝癌的新方向。