目的表位疫苗是近年来发展起来的一种独特的疫苗设计思路,是目前研制感染性疾病、恶性肿瘤以及自身免疫性疾病等疫苗设计的新方向。基于表位的疫苗设计可以特异性的增强保护性免疫反应的强度,而排除非保护性以及抑制性免疫反应的影响。因此,在筛选抗原的保护性B细胞和T细胞表位基础上,合理组合设计表位疫苗,可以避免常规抗原结构中可能出现的非必要以及抑制性表位的作用。幽门螺杆菌(Hp)自然感染时,激发的免疫应答不能产生有效的保护作用,因而有必要在抗原选择以及表位水平对抗原进行改造,激发更有效的免疫应答。目前对Hp感染的免疫保护机制研究表明:机体的CD4+T细胞而非CD8+T细胞反应对Hp感染的免疫保护是必需的。因此,鉴定Hp抗原的Th表位并明确各表位特异性的T细胞免疫应答特征,成为以表位为基础的幽门螺杆菌疫苗设计的前提。在筛选Hp抗原的特异性B细胞和Th细胞表位的基础上,合理组合设计表位疫苗,有可能激发有效的免疫应答。本课题以BALB/c小鼠(H-2d)为动物模型,采用生物信息学预测,淋巴细胞功能实验鉴定Hp保护性抗原UreB的H-2d限制性的Th细胞表位,并利用筛选出的Th表位和文献报道的一个UreB的中和性B细胞表位设计、构建表位疫苗,并对其免疫原性进行初步研究。方法1.RANKPEP软件预测全长UreB蛋白上可能的H-2d限制性Th表位,合成多肽,淋巴细胞增殖实验、流式细胞分析及CD4+T淋巴细胞增殖实验进行鉴定;MHC限制性分析表位识别的遗传限制性;ELISA方法分析表位刺激CD4+T淋巴细胞分泌的细胞因子;淋巴细胞增殖实验分析表位之间的协同效应;ELISA检测表位肽与鼠抗rUreB及鼠抗Hp血清的免疫反应性。2.初步鉴定的表位肽免疫BALB/c小鼠,淋巴细胞增殖实验检测细胞免疫应答,RT-PCR检测脾淋巴细胞的细胞因子mRNA,流式细胞分析多肽免疫小鼠的脾CD4+T淋巴细胞相对数量。3.将鉴定的Hp的UreB的三个Th表位及一个中和性B细胞表位串联起来,表