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研究目的:观察MRL/lpr狼疮鼠外周血、骨髓及髓外造血生成情况;MRL/lpr狼疮鼠和C57BL/6小鼠骨髓成骨细胞(osteoblasts,OB)表面的粘附分子N-Cadherin表达水平差异及对造血干细胞分化的影响;观察同种异体BMMSCs(bone marrow masenchymal stem cells,BMMSCs)静脉输注对MRL/lpr狼疮鼠造血的影响。方法:(1)通过血细胞分析仪及流式细胞术分析MRL/lpr狼疮鼠和C57BL/6小鼠外周血、骨髓、脾脏细胞各系的数量及比例。采用甲基纤维素半固体集落形成试验(CFU)法检测MRL/lpr狼疮鼠和C57BL/6小鼠骨髓及脾脏中CFU-pre-B、BFU-E、CFU-GM数目。实验分组:1、MRL/lpr狼疮鼠组(MRL/lpr),2、C57BL/6小鼠组(C57BL/6)。(2)分离培养MRL/lpr狼疮鼠BMMSCs培养至第三代,定向诱导成骨分化,茜素红染色进行成骨细胞鉴定,Western blot检测成骨细胞分化各阶段N-Cadherin的表达。比较MRL/lpr狼疮鼠和C57BL/6小鼠成骨细胞N-Cadherin的表达差异。将MRL/lpr狼疮鼠和C57BL/6小鼠成骨细胞分别与MRL/lpr狼疮鼠和C57BL/6小鼠的造血干细胞共培养,之后采用CFU检测造血干细胞的分化能力。共培养体系实验分组:1、C57BL/6小鼠的OB为饲养层细胞,培养液中加入C57BL/6小鼠的HSCs(C57+HSCs组);2、C57BL/6小鼠的OB为饲养层细胞,培养液中加入MRL/lpr狼疮鼠的HSCs(C57+MHSCs组);3、MRL/lpr狼疮鼠的OB为饲养层细胞,培养液中加入C57BL/6小鼠的HSCs(MRL+HSCs组);4、MRL/lpr狼疮鼠的OB为饲养层细胞,培养液中加入MRL/lpr狼疮鼠的HSCs(MRL+MHSCs组)。(3)使用慢病毒感染前成骨细胞系MC3T3-E1,下调其N-Cadherin的表达,采用Western blot鉴定N-Cadherin的表达水平。将感染前后的MC3T3-E1细胞,分别与MRL/lpr狼疮鼠和C57BL/6小鼠的造血干细胞共培养,采用CFU检测造血干细胞的分化能力。共培养实验分组:1、MC3T3-E1为饲养层细胞,培养液中加入C57BL/6小鼠的HSCs(MC3T3+HSCs组);2、MC3T3-E1为饲养层细胞,培养液中加入MRL/lpr狼疮鼠的HSCs(MC3T3+MHSCs组);3、感染后1070细胞为饲养层细胞,培养液中加入C57BL/6小鼠的HSCs(1070+HSCs组);4、感染后1070细胞为饲养层细胞,培养液中加入MRL/lpr狼疮鼠的HSCs(1070+MHSCs组)。(4)采用全骨髓贴壁法分离培养C57BL/6小鼠的BMMSCs并对16周龄的MRL/lpr狼疮鼠进行尾静脉输注,同时以磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)注射作为对照组。在20周龄进行统一处死,取血、骨髓、脾脏,采用血细胞分析仪及流式细胞术分析各组MRL/lpr狼疮鼠外周血、骨髓、脾脏细胞各系的数量及比例差异,采用CFU方法检测骨髓、脾脏中造血祖细胞形成集落数的差异。结果:(1)与C57BL/6小鼠相比,MRL/lpr狼疮鼠外周血中红细胞、血红蛋白、血小板减少,T淋巴细胞、记忆性B细胞及浆细胞比例增高,总B淋巴细胞比例减少。MRL/lpr狼疮鼠骨髓中,总B淋巴细胞、pro-B细胞、pre-pro-B细胞比例降低,浆细胞和HSCs比例增高。MRL/lpr狼疮鼠脾脏中,总B淋巴细胞比例减少,浆细胞比例增高,髓系比例减少。(2)MRL/lpr狼疮鼠HSCs向B系分化能力减弱。(3)MRL/lpr狼疮鼠HSCs在正常OB支持下,向B系及红系分化减少;正常HSCs在狼疮OB支持下,向B系及红系分化增加;狼疮鼠OB的N-Cadherin表达高于C57BL/6小鼠;慢病毒感染MC3T3-E1前成骨细胞系,成功下调N-Cadherin的表达,N-Cadherin下调后MC3T3-E1支持HSCs向B系、红系分化减少。(4)MRL/lpr狼疮鼠静脉输注射正常小鼠BMMSCs,受体小鼠外周血血小板数量改善,浆细胞比例下降,骨髓中粒-巨核细胞比例增高,T淋巴细胞和HSCs比例下降,HSCs向B系分化增加,脾脏中T淋巴细胞比例下降,HSCs比例升高。结论:MRL/lpr狼疮鼠外周血、骨髓及脾脏造血异常,B淋巴细胞存在分化异常。OB表面N-Cadherin的高表达能促进HSCs向B系分化,N-Cadherin在骨髓龛中对HSCs分化起着重要作用。BMMSCs输注对狼疮鼠外周血、骨髓及脾脏不同系造血细胞有影响。对狼疮鼠的血液系统损伤有治疗意义。