紫菜是我国海藻养殖业的支柱产业之一也是主要的出口创汇海产品。近年来，随着紫菜栽培业规模的逐年扩大，对紫菜优良品种的供应要求越来越高。紫菜易于养殖，藻体形态结构简单，细胞发育分化易于调控，酶解紫菜产生原生质体及原生质体的再生技术已经成熟，易于进行分子水平上的研究。因此，开展紫菜基因工程研究，利用现代分子生物学的手段培育紫菜新品种是十分必要的，也具备现实可行性。同时，也有望将紫菜作为生物反应器来生产有用的外源蛋白。为此，我们以条斑紫菜的原生质体为受体，进行转基因研究，初步建立其转基因体系。 纯系培育是传统紫菜育种及进行紫菜生物工程研究的先决条件。本研究选取青岛地区野生条斑紫菜(Porphyra yezoensis)，利用酶解制备原生质体进行再培养的方法培育了营养体纯系PY-qingdaol。对PY-qingdaol的18S rRNA基因进行了克隆和序列测定。将该基因与从GenBank获得的22个紫菜进行了分析、比较，并以相邻连接法构建了紫菜较为一致的系统发生树。结果表明利用紫菜18S rDNA基因序列差异可较精确的进行紫菜种间乃至品系的划分，这为进行紫菜的种质鉴定提供了一个新的思路。 为确立电击法转化条斑紫菜原生质体的条件、确定有效的启动子并验证以18S rDNA为外源基因整合位点的可行性，构建了以条斑紫菜18S rDNA片段为同源臂、CaMV35S为启动子、GUS基因为报告基因的同源重组型表达载体，并利用电击法对外源GUS基因在条斑紫菜原生质体瞬间表达进行了初步探索。实验结果表明CaMV35S启动子能够在条斑紫菜原生质体中启动GUS基因的瞬间表达；电击法是条斑紫菜基因转移的有效方法；当电场强度为2KV／cm，脉冲时间为300ms，脉冲次数为1次时，外源基因的转化效率较高；以18S rDNA片段为同源臂的同源重组型载体可以提高GUS基因在条斑紫菜原生质体中的瞬时表达。 为确定合适的选择性标记基因，以条斑紫菜18S rDNA片段为同源臂，构建了分别利用SV40启动子和CaMV35S启动子的两种cat基因的同源重组型表达载体pQD一CAT一control和pQD一CAT一Enhancer。利用电击法将所构建的表达载体转化条斑紫菜原生质体。结果表明，SV40启动子和C咖V35S启动子均可以驱动cat基因在条斑紫菜原生质体中有效表达;所构建的以185 rDNA片段为同源臂的两种同源重组型载体均可实现cat基因在条斑紫菜原生质体中的稳定表达;当以cat基因作为选择性标记基因时，氯霉素可以作为紫菜原生质体基因转化的选择压力。 对小鼠的7天为IL cDNA，进行了克隆和序列测定，并构建了以条斑紫菜185rDNA片段为同源臂、cat基因为标记基因、了万才IL基因为外源基因、分别利用SV4O启动子和CaMV35S启动子的同源重组型表达载体pQD一TRAIL一CAT。利用电击法将其转化条斑紫菜原生质体，经氯霉素初步筛选，检测到外源基因己整合到紫菜基因组中。 进行了条斑紫菜原生质体的玻璃化冷冻保存研究，发现玻璃化保护剂VS6 (10%DMSO，30%甘油，10%蔗糖)的保存效果较好，其最佳冻存程序是:25%VS6过渡处理5 min后，用ooC预冷的VS6处理3 min，直接液氮保存，化冻时采用40oC水浴快速化冻。按此方法，冻存后的原生质体的存活率可达66.5%，并且能再生成叶状体。 总之，本研究初步建立了条斑紫菜原生质体的转基因体系，优化了电击法转化条斑紫菜原生质体的条件，确定了Sv40启动子和CaMV35S启动子为有效的启动子，cat基因可以作为选择性标记基因，以1 85 rDNA片段为同源臂的同源重组型表达载体可以有效的表达外源基因。此外还首次成功地进行了条斑紫菜原生质体的玻璃化冷冻保存，不仅为藻类的种质保存研究积累了资料，也可以为以后紫菜原生质体的遗传转化操作随时提供理想的实验材料。这些研究为进一步通过转基因的手段改良紫菜品种，实现以紫菜为生物反应器来大量生产外源蛋白奠定了重要的基础。