背景：　　非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）已成为现今全球最常见慢性肝病之一，其发病机制尚未完全阐明[1,2]。近年研究显示[3]，炎症小体NLRP3与多种炎症相关性疾病的发生密切相关，敲除NLRP3可以阻止高脂饮食导致的IR、肥胖和NAFLD的进展， NAFLD作为一种炎症相关性疾病，NLRP3在其发病中的作用及机制的研究也日益受到重视[3]。　　研究表明[4,5]，肠道菌群和高脂饮食共同作用产生以脂多糖（LPS）为主要成分的代谢性内毒素血症是NAFLD重要的致病因素。LPS作为Toll样受体4（Toll-like4）的配体，能活化炎症小体NLRP3，产生半胱氨酸蛋白水解酶-1（Caspase-1），介导促炎性细胞因子IL-1β和IL-18等的前体转化为活性形式并分泌到细胞外，参与肝脏炎症及胰岛素抵抗（IR）的发生[6,7]。　　氧化应激是炎性反应的一个重要特征，通常认为ROS可作为一个重要的上游信号调节炎症小体NLRP3的活化[8,9]。转录因子NF-E2相关因子2（Nrf2）是维持细胞内氧化平衡的关键转录因子，是调节细胞内氧化应激的中心环节[10]。既往大多数体内外研究及我们前期研究均表明[11-13]，Nrf2通过参与抗氧化还原反应而拮抗ROS，降低细胞内ROS水平。因此，我们推测Nrf2核转位应该有助于降低NLRP3活化程度，对NAFLD起保护作用。然而，现有部分体外研究[14]却得出了相反结果，其研究表明Nrf2是NLRP3活化的前提，敲除Nrf2导致库普弗细胞（KC）成熟障碍， NLRP3不能活化，这种矛盾的结果需要更深入的研究。因此，有必要对肝脏中除KC外的更多细胞进行研究，观察Nrf2对其NLRP3表达的影响。　　本研究以大鼠肝细胞和肝星状细胞（HSC）为研究对象，观察LPS诱导时NLRP3及其下游分子Caspase-1及炎症因子IL-1β和IL-18表达的变化。并使用姜黄素处理肝细胞和肝星状细胞后，观察Nrf2核转位对NLRP3及其下游分子的影响。通过本研究明确Nrf2在LPS诱导的肝细胞和肝星状细胞损伤模型中对NLRP3及其下游分子的调控作用，为阐明NAFLD的发病机制提供实验和理论依据。　　目的：　　本研究以大鼠肝细胞和肝星状细胞为研究对象，利用LPS诱导NLRP3活化，观察其下游分子Caspase-1及炎症因子IL-1β和IL-18表达的变化，以探讨在肝细胞和肝星状细胞中LPS对NLRP3表达的影响。在此基础上诱导Nrf2核转位，观察其对炎症小体NLRP3及下游相关分子的作用，以明确Nrf2对NLRP3表达的影响，为阐明NAFLD的发病机制提供实验和理论依据。　　方法：　　1.利用LPS构建大鼠肝细胞及肝星状细胞损伤模型。按LPS诱导浓度不同将大鼠肝细胞及肝星状细胞分别为0μg/mL(对照组)、0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.4μg/mL共5个组，检测不同浓度LPS诱导后细胞的活性及ALT、LDH、MDA及GSH的变化。　　2.将大鼠肝细胞及肝星状细胞分为对照组和实验组(按LPS诱导时间分为30min、60min、120min、240min组)，提取各组总mRNA，检测各组细胞中NLRP3、Caspase-1及下游炎症因子IL-1β及IL-18 mRNA水平的变化。　　3.将大鼠肝细胞及肝星状细胞分为对照组、LPS诱导组和姜黄素组。对照组未做处理；LPS组加入终浓度为0.2μg/mL的LPS，诱导时间为120min；姜黄素组在LPS诱导前8h加入浓度为25μmol/L的姜黄素，余操作和LPS诱导组相同。Western Blot法检测各组中胞核内Nrf2蛋白表达的变化，Real time PCR法检测NLRP3及Caspase-1的mRNA表达量，ELISA法检测各组中IL-1β及IL-18水平变化。　　结果：　　1.与0μg/mL组、0.05μg/mL组、0.1μg/mL组和0.2μg/mL组相比，0.4μg/mL组肝细胞活性显著降低（P<0.05）；余各组间均无显著差异（P＞0.05）。可见，LPS诱导浓度达0.4μg/mL时，与其余各组相比，肝细胞活性降至最低。与0.1μg/mL组相比，0.2μg/mL组肝星状细胞活性显著升高（P<0.05）；与0.2μg/mL组相比，0.4μg/mL组肝星状细胞活性显著降低（P<0.05）。与0.1μg/mL组相比，0.2μg/mL组肝细胞及肝星状细胞 ALT、LDH、MDA水平显著升高（P<0.05）；与0.1μg/mL组相比，0.2μg/mL组肝细胞及肝星状细胞 GSH水平显著降低（P<0.05）。　　2.与60min组相比，120min组肝细胞及肝星状细胞中NLRP3、Caspase-1、IL-1β及IL-18 mRNA表达量显著升高（P<0.05）；与120min组相比，240min组肝细胞及肝星状细胞中NLRP3、Caspase-1、IL-1β及IL-18 mRNA表达量降低。可见，LPS诱导时间在30min到120min时，肝细胞及肝星状细胞各组炎症小体NLRP3、Caspase-1及其下游炎症因子IL-1β及IL-18 mRNA表达量随LPS诱导时间延长而逐渐升高，在诱导时间为120min时达到峰值，随后各mRNA表达量下降。　　3.Western Blot检测肝细胞及肝星状细胞胞核中Nrf2蛋白的表达，与对照组相比，姜黄素组胞核Nrf2蛋白表达显著增加（P＜0.05）；与LPS诱导组相比，姜黄素组中胞核Nrf2蛋白表达显著增加（P＜0.05）。Real time PCR检测肝细胞及肝星状细胞NLRP3及Caspase-1mRNA的表达，与对照组相比， LPS诱导组中NLRP3及Caspase-1 mRNA表达水平显著升高（P＜0.05）；与LPS诱导组相比，姜黄素组中NLRP3及Caspase-1 mRNA表达显著降低（P＜0.05）。ELISA检测肝细胞及肝星状细胞IL-1β及IL-18水平，与LPS诱导组相比，姜黄素组中IL-1β及IL-18水平显著降低（P＜0.05）。　　结论：　　1.通过不同浓度的LPS诱导，成功构建肝细胞及肝星状细胞的损伤模型。　　2.LPS能诱导NLRP3激活，并促进其下游分子Caspase-1及炎症因子IL-1β和IL-18mRNA的表达，并且在LPS作用120min时达到峰值，随后表达下降。　　3.Nrf2核转位能显著降低NLRP3及其下游分子Caspase-1及炎症因子IL-1β和IL-18的表达，表明Nrf2的核转位能抑制NLRP3的活化，进而对NAFLD发挥保护作用。本结果与Nrf2在巨噬细胞中对NLRP3的调节作用相反，提示Nrf2在不同细胞中可能对NLRP3的调节机制不尽相同，需要深入研究。