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目的: 子宫颈癌(cervical cancer)对全世界妇女的生命和健康构成严重威胁。高危型人乳头瘤病毒(High-risk human papillomavirus,HR-HPV)的持续感染是导致宫颈癌发生的必要条件,但从HR-HPV感染到宫颈癌前病变再进展为子宫颈癌,时间可能长达数年甚至数十年。因此有效的筛查计划即可及早发现癌前病变并给予干预,可以预防宫颈癌的发生。 最早被应用于临床的巴氏涂片使全球宫颈癌的发病率和死亡率显著降低。然而,由于巴氏涂片存在一定的缺陷以及其结果受许多因素的影响,仍具有较低的灵敏度及较高的假阴性率。随着液基细胞学技术应运而生,在一定程度上改善及解决了传统巴氏涂片所存在的相关问题,诊断的准确性远高于传统涂片的准确性。随着对宫颈癌病因的深入研究,有科学家提出HR-HPV持续感染是引起宫颈癌及癌前病变发生发展的必要条件。然而,HPV-DNA检测只能检测出是否存在高危型HPV的感染,并不能区分是短暂感染还是持续感染。近年来,关于高危型HPV致癌机制的研究表明,HPV基因组中的E6和E7癌基因对肿瘤的发生起重要作用,这两个癌基因可编码E6和E7蛋白,这两种蛋白表达物可以分别与肿瘤抑制基因p53和Rb的结合,引起不受控制的细胞增殖,从而导致癌前病变和癌症。针对HPV致癌机制,2012年美国食品和药品管理局(FDA)批准了Aptima检测技术,该检测方法不仅可以检出是否存在高危型HPV感染,而且可以判断HPV感染是否处于活动期,从而对宫颈病变的进展和预后进行预测和评估。本文对HPV-DNA初筛阳性的患者,进行Aptima检测,旨在研究HPVE6/E7mRNA检测对不同级别宫颈病变中的诊断效能及其表达水平,从而为宫颈病变的分层管理提供依据。 方法: 收集2017年6月至2018年6月期间在郑州大学第二附属医院妇科门诊(河南省子宫颈癌防治中心),因接触性出血、阴道不规则出血、阴道排液等或常规体检行HC2初筛阳性的381例患者为研究对象。对所有HC2初筛阳性的381例患者同时行TCT检查及HPVE6/E7mRNA检测,如果细胞学检查为阳性,则在阴道镜检查的指导下进行宫颈活检,并将活检组织病理学作为诊断的金标准。对不同细胞学和组织学HPVE6/E7mRNA阳性率及表达水平进行比较,对HPVE6/E7mRNA和HC2两种检测方法对CIN2+诊断效能进行比较。 结果: (1)不同细胞病理学中HPVE6/E7mRNA阳性率及表达水平的比较分析: 381例患者的细胞学结果为NILM、ASCUS、LSIL、ASC-H、HSIL、CC者分别为65例(17.06%)、134例(35.17%)、35例(9.19%)、72例(18.90%)、57例(14.96%)、18例(4.72%)。其HPVE6/E7mRNA阳性率分别为30.76%、48.51%、45.71%、51.39%、70.18%、72.22%,不同细胞学类型中HPVE6/E7mRNA阳性率差异具有统计学意义(x2=22.88,P<0.05)。其HPVE6/E7mRNA的表达水平(中位数(四分位数间距Q25,Q75))分别为:0.61(0.24,24.07)、0.96(0.43,113.74)、0.89(0.68,224.98)、67.9(0.86,275.14)、328.09(0.90,769.90)、211.38(0.91,1306.92),多组定量资料采用秩和检验,不同细胞学类型中HPVE6/E7mRNA表达量差异具有统计学意义(F=87.61,P<0.05)。 (2)不同组织病理学中HPVE6/E7mRNA阳性率及表达水平的比较分析: 316例细胞学异常者经阴道镜活检证实,慢性宫颈炎、宫颈低级别鳞状上皮内病变(CIN1)、宫颈高级别鳞状上皮内病变(CIN2)、宫颈高级别鳞状上皮内病变(CIN3)、宫颈鳞状细胞癌者分别为102例(32.28%)、82例(25.95%)、48(15.19%)、63(19.94%)、21(6.65%);阳性率最高的为宫颈癌组,最低的为CIN1组,整体组间差异具有统计学意义(x2=44.03,P<0.05)。其HPVE6/E7mRNA的阳性率分别为40.20%、36.59%、72.92%、74.60%、85.71%;其HPVE6/E7mRNA的表达水平(中位数(四分位数间距Q25,Q75))分别为0.73(0.24,61.61)、0.86(0.43,92.67)、166.49(0.89,289.01)、278.90(0.99,864.45)、278.69(163.24,546.81),不同组织病理学类型中HPVE6/E7mRNA表达量差异具有统计学意义(x2=102.74,P<0.05),HPVE6/E7mRNA负荷量随组织病理学结果严重程度的升高而呈现增加趋势。进一步两两比较,宫颈浸润癌和CIN3表达量最高,两者相近,其次为CIN2,CIN1和慢性宫颈炎表达量最低,且两者相近。 (3)不同组织病理学中HPV-DNA的负荷量的比较分析: 组织病理学诊断为宫颈炎症组、CIN1、CIN2、CIN3、宫颈浸润癌中HPV-DNA的负荷量(中位数(四分位数间距Q25,Q75))分别为:68.07(20.60,125.94)、42.38(18.03,86.27)、102.18(32.53,203.79)、74.23(20.02,221.76)、106.67(64.23,220.07),负荷量最高的为宫颈浸润癌组,其次为CIN2组,最低的为CIN1组,多组秩和检验可得出不同级别病变的HPV-DNA负荷量差异具有统计学意义(x2=18.64,P<0.05)。 (4)HPVE6/E7mRNA表达水平与HPV-DNA负荷量Spearman秩相关分析结果显示,HPVE6/E7mRNA表达水平与HPV-DNA负荷量之间无明显相关性(r=0.022,P>0.05)。 (5)采用ROC曲线分析HPVE6/E7mRNA检测和HC2检测在CIN2+病变中的诊断效能,HPVE6/E7mRNA检测和HC2检测的曲线下面积分别为0.826[95%CI(0.781,0.871)]、0.622[95%CI(0.558,0.685)]。HPVE6/E7mRNA诊断临界值为165.31copies/ml。若以HPVE6/E7mRNA表达量≥165.31copies/ml作为诊断界值,则此时该诊断方法对于CIN2+诊断的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比、阴性似然比分别为80.30%(106/132)、76.09%(140/184)、70.67%(106/150)、85.37%(140/164)、3.36、0.26。HPV-DNA诊断临界值为52.44pg/ml。若以HPV-DNA负荷量≥52.44pg/ml作为诊断界值,则此时该诊断方法对于CIN2+诊断的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比、阴性似然比分别为75.76%(100/132)、52.17%(96/184)、53.19%(100/188)、75.00%(96/128)、1.58、0.46。 结论: (1)HPVE6/E7mRNA阳性率及表达量随细胞病理学和组织病理学级别升高而呈现增加趋势; (2)HPV-DNA表达负荷量与宫颈病变严重程度相关; (3)HPVE6/E7mRNA表达水平与HPV-DNA负荷量之间无明显相关性; (4)HPVE6/E7mRNA检测对CIN2及以上的诊断效能优于HPV-DNA检测,可对宫颈病变的分层管理提供临床依据。