表面活性剂胶团溶胀法制备大孔魔芋葡甘聚糖微球的研究

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随着生物技术的迅猛发展,越来越多的蛋白质和核酸等生物大分子被用于生物医药等方面的研究和应用中,对生物大分子的分离纯化提出了很高的要求。生物大分子具有分子量大,结构复杂,以及稳定性差等特点,因而对生物大分子的的分离纯化操作必须在较温和的条件下快速高效的进行,以尽可能的保持生物分子的活性和天然构象。分离介质是分离纯化中的关键材料,常规多孔介质分离生物大分子时,由于孔径较小(一般在100-300范围内),会导致分离时间长、生物大分子易失活等问题。为了解决这个问题,具有百纳米级孔径的超大孔微球应用于生物大分子的分离纯化中,并取得良好的效果。但是由于目前制备的生物大分子分离介质大多为疏水性介质,生物相容性较差,要将其用于大分子物质的分离纯化,必须对其进行表面亲水修饰,这就使制备过程更加复杂,同时存在亲水修饰层不稳定,在操作过程中可能脱落等问题。在前期工作中,我们利用反胶团溶胀法制备出了超大孔的聚苯乙烯微球,孔径可达300nm以上。该方法操作简便易实施,设备要求比较低,效果也较好,但是最终得到的介质也为疏水性介质。受该方法的启发,用其反向机理—表面活性剂胶团溶胀法制备大孔生物分离介质,成功制备得到了孔径分布在100nm左右的魔芋葡甘聚糖(Konjac glucomannan,KGM)微球,并对大孔的形成机理进行了研究。论文工作分为三个部分。第一部分综述了亲水性大孔分离介质提出的背景、研究意义、国内外研究进展、本论文的目的和创新点等问题。第二部分提出了表面活性剂胶团溶胀法制备魔芋葡甘聚糖大孔微球的新思路,具体介绍了整个实验的制备工艺。第三部分通过对表面活性剂的类型、魔芋葡甘聚糖溶液浓度、表面活性剂用量以及助表面活性剂用量等对微球的形貌和产率的影响因素进行了考察,优化了反应条件,初步探讨了大孔的形成机理。并对优化实验得到的微球进行了表征,得到了孔径在100nm左右,表面有明显孔道分布的介质。从实验所得到的结论可以得出,含有大量水溶性表面活性剂的水相分散到油相后,水相液滴内大量的胶团会从外油相吸收大量的油,进而溶胀,形成油/表面活性剂/水(W/S/O)双连续乳液,交联过程中会发生相分离,内油相所占的体积部分就形成大孔。湿球通过CO2临界点干燥仪进行干燥,得到微球干粉,通过JSM-6700F冷场发射扫描电子显微镜、IV9500全自动压汞仪、ASAP2020BET比表面积测定仪等手段对微球的表面结构,孔径大小,孔径分布等进行了测定。研究结果表明,通过表面活性剂胶团溶胀法制备大孔微球,方法简单,操作简便易行,生物相容性较强,可以直接用于生物大分子的分离纯化。
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