miR-34a抑制结肠癌细胞SW480增殖、迁移侵袭及肝转移作用的研究

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目的:结直肠癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一,复发和转移是导致病人死亡的重要原因,远处脏器转移以肝转移最为常见。microRNA(miRNA)是一类内源性非编码小RNA,在转录后水平调控基因的表达,在肿瘤的发生发展中发挥重要作用。在结直肠癌中,已经发现多种miRNA表达存在差异。miR-34a是近年来研究较为火热的miRNA,本研究中,我们通过体内外实验研究miR-34a对结直肠癌细胞SW480的增殖、迁移侵袭和裸鼠肝转移能力的影响,探讨其可能的作用机制,为临床结直肠癌转移的基础研究和临床诊断、治疗提供理论指导和有益线索。  研究方法:1、将SW480细胞分成三组:miR-34a转染组、空病毒载体组和空白对照组。利用慢病毒载体技术,将miR-34a过表达的慢病毒、空病毒载体转染SW480细胞,未做处理细胞作为空白对照组,用荧光显微镜观察GFP绿色荧光表达,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测各组细胞中miR-34a的表达。2、应用CCK8法检测三组细胞增殖能力;应用划痕实验、Transwell小室实验分别检测细胞迁移和侵袭能力;应用Western blot实验检测细胞内上皮-间质转化(EMT)相关蛋白E-cadherin和Vimentin的表达水平。3、采用脾脏被膜下注射法建立裸鼠肝转移模型,随机将36只裸鼠分为3组,每组12只,分别于脾脏被膜下注射上述三组SW480细胞,定期观察裸鼠的一般状态,30d后处死裸鼠,剖腹记录并比较各组裸鼠肝转移灶的数量。  结果:1、慢病毒转染SW480细胞72h后,miR-34a转染组与空病毒载体组均可观察到GFP绿色荧光,而空白对照组无绿色荧光。当MOI=50时,转染效率高达95%。RT-PCR结果显示转染组miR-34a的表达显著高于空病毒载体组及空白对照组(P<0.01),成功构建miR-34a过表达SW480细胞系。2、与空病毒载体组及空白对照组相比,miR-34a过表达组细胞的增殖、侵袭和迁移能力降低(P<0.05),过表达miR-34a使EMT相关蛋白E-cadherin蛋白表达增加、Vimentin蛋白表达降低。3、miR-34a组中的裸鼠肝转移灶较其他两组少,Ⅲ级所占的比例低(P<0.05)。  结论:miR-34a可抑制结肠癌细胞SW480增殖、迁移和侵袭及裸鼠体内肝转移能力,并能影响EMT相关蛋白E-cadherin和Vimentin的表达,因此,miR-34a可能成为结肠直肠癌复发转移治疗新的分子靶点。
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