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MdHB1是苹果HD-Zip I亚家族的一个转录因子，研究表明该转录因子参与调控果实成熟，响应激素应答。为了进一步挖掘MdHB1的生物学功能，本实验室通过酵母双杂交实验发现MdPYL9与MdHB1存在潜在的互作关系。本文以此为研究基础，从‘皇家嘎拉’中克隆出MdPYL9基因，并对其进行基本的生物学特征分析，重点从基因和蛋白层面验证MdHB1和MdPYL9之间的关系，并结合ABA信号核心基因预测MdHB1在ABA信号途径中的作用。实验结果如下： 1、在苹果基因组数据库中共筛选到14个PYLs，利用MEGA5.05邻近法做系统进化树分析，结果表明这14个成员分成三个亚家族。Subfamily I有四个成员，subfamily II和subfamily III分别有五个成员，各亚家族之间基因结构存在差异。MdPYL9属于subfamily I，包含两个内含子。以‘皇家嘎拉’果肉为材料克隆到了MdPYL9，该基因开放阅读框全长555-bp，编码184个氨基酸，具有高度保守的PYR/PYL/RCAR结构域，并与AtPYL9、VvPYL9、SlPYL9、FaPYL9蛋白有高度的相似性。 2、 亚细胞定位实验结果表明 MdPYL9 定位在细胞核、细胞质和气孔中；BiFC实验中在烟草细胞细胞核、细胞质、气孔中均有YFP的表达，表达位置与MdPYL9和MdHB1的亚细胞定位结果一致，该实验证明了ABA受体MdPYL9与MdHB1在活体细胞中互作。 3、利用实时荧光定量 PCR 进行基因的组织特异性表达分析，结果显示MdPYL9在花、茎、叶、果实中均有表达，且随着果实的发育呈先上升后下降的表达趋势，与MdHB1的表达趋势相同，相关性分析表明这两个基因表达呈线性关系（R2=0.9969）；此外，在苹果上沉默MdHB1基因，MdPYL9的表达下调了40%，转MdHB1烟草NC89OEHB1中NtPYL9-like基因的表达量是野生型的6倍；运用SPSS17.0进行相关性分析，结果显示MdPYL9和MdHB1的表达量呈线性关系，这些结果表明MdPYL9和MdHB1在转录水平上有密切的关系。 4、以‘皇家嘎拉’叶片为材料，克隆到长为1481-bp的MdPYL9启动子，启动子区域存在大量HD-ZIP I蛋白可以结合的回文结构，通过PlantCare在线预测软件得知该启动子区域有ABRE、ARE、G-box 等大量顺式作用元件；将ProMdPYL9 融合到带有GUS 标签的载体上进行GUS 活性实验，结果表明MdHB1可以增强MdPYL9启动子活性。 5、500 μM ABA处理‘米奇拉’果实，24 h后MdHB1基因的表达量明显升 高，此结果在转基因烟草NC89OEHB1中也得到了验证。同时，ABA 处理‘米奇拉’果实，苹果中预测的ABA信号转导核心基因MdPYL9、MdSnRK2.3/2.6、MdPP2C53/77的表达都显著上调。 6、 在苹果上瞬时过表达MdHB1后MdHB1的表达量是对照组的10倍多， MdPYL9、MdSnRK2.3/2.6、MdPP2C53/77 的表达显著上调，分别是对照组的 2倍到6倍不等。相反，VIGS诱导的基因沉默中，MdHB1基因表达下调了22%， MdPYL9、MdSnRK2.6的表达量也随之降低。该结果表明MdHB1能不同程度的影响ABA核心基因的表达。