【摘 要】
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随着转基因技术的不断发展，转基因动物的安全性受到越来越多的关注，因此构建安全高效的表达载体是必要的。本实验通过构建质粒载体pCAG-FSTN-IRES-AcGFP1-polyA，制备了无质粒骨
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随着转基因技术的不断发展，转基因动物的安全性受到越来越多的关注，因此构建安全高效的表达载体是必要的。本实验通过构建质粒载体pCAG-FSTN-IRES-AcGFP1-polyA，制备了无质粒骨架序列、无抗性标记的双顺反子基因转移体CAG-FSTN-IRES-AcGFP1-polyA，以及两端带有核基质结合序列(matrix attachment regions,MAR)的双顺反子基因转移体MAR-CAG-FSTN-IRES-AcGFP1-polyA-MAR，并对这三种载体的转染、整合与表达功能进行了比较分析。结果表明，无载体骨架序列的双顺反子基因转移体仍能正常的行使基因转移、整合、表达等功能;在整合效率的比较中，带有MAR序列的双顺反子基因转移体明显好于其它两组;而且，带有MAR序列的双顺反子基因转移体的表达水平也明显优于其它两组。 另外，我们还进行了这三种载体转基因单克隆细胞的筛选工作，最终获得了8株稳定建系的MAR双顺反子基因转移体的单克隆细胞，并对这些单克隆细胞的整合方式以及RNA水平的表达情况进行了研究。这为动物构建安全、高效的转基因载体提供了新的方法。
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