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选用16头浏阳黑山羊(BW=20.6±0.66kg)作为试验动物,分成8个处理组,每组2个重复。按照4×2因子设计,各处理组分别饲喂含四个磷水平(0.141％,0.159％,0.177％,0.194％)和两个粗蛋白水平(9.23％和12％)的八种混合日粮。饲喂25天后屠宰,取消化道组织,采用基因克隆技术从山羊回肠黏膜克隆得到SLC34A2基因部分片段。采用荧光real timeRT-PCR技术和Western blot技术,研究了不同氮磷水平下山羊体内SLC34A2 mRNA转录量和Na/PiⅡ转运蛋白的表达情况。
研究结果表明:SLC34A2基因片段共1032bp,属于Na-Pi共转运超蛋白家族成员,其编码的蛋白含有8个跨膜螺旋,形成两个功能结构域,负责Na-Pi共转运。
日粮磷水平显著降低肝脏SLC34A2 mRNA转录量(P<0.01),同时日粮氮、磷水平对肝脏SLC34A2基因的ACt值具有极显著的交互作用(P<0.01)。高粗蛋白日粮处理对肝脏SLC34A2基因的转录促进作用更为明显,高于低粗蛋白日粮处理。
日粮磷水平显著增加瘤胃上皮SLC34A2 mRNA转录量(P<0.05),日粮氮、磷水平对瘤胃上皮SLC34A2 mRNA转录量具有极显著的交互作用(P<0.01)。日粮磷水平对Na/PiⅡb蛋白的表达影响呈二次线性关系,日粮磷水平为0.177％H寸Na/PiⅡb蛋白表达量最低。瘤胃上皮Na/PiⅡb蛋白的表达与日粮磷水平呈二次方或三次方线性关系(P<0.01)。
日粮磷水平极显著影响(P<0.01)腮腺SLC34A1 mNRA转录量。日粮氮磷水平之间对腮腺SLC34A2mRNA转录量存在显著的交互作用(P<0.05)。
肾脏Na/PiⅡa蛋白的表达量及回肠Na/PiⅡb蛋白表达量不受日粮磷水平的影响(P>0.05)。
结论认为:山羊对低磷日粮的适应主要是通过增加肾脏SLC34A1mRNA转录量和小肠SLC34A2 mRNA转录量来调控Pi的转运与平衡。在腮腺、瘤胃上皮和肝脏也存在Na-Pi共转运系统,且受日粮磷水平的调控。