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目的:miR-27a与本课题组前期研究中和幽门螺旋杆菌相关胃病(HPGD)相关的NF κB、wnt/β catenin炎症通路、及下游炎症因子TNF-α等存在关联,且其常见位点的基因多态性会对其表达情况产生影响。本研究通过对HPGD患者胃黏膜miR-27a rs895819、rs11671784基因多态性及不同病理阶段miR-27a表达进行检测,探讨Hp相关胃病发生发展的机制,结合中医证候分析,为恶性胃病提供早期预警依据。方法:1.检测方法Hp感染率及Hp感染程度以用快速尿素酶法及美蓝染色法判断;胃黏膜病理情况通过HE染色观察。直接测序法检测胃黏膜miR-27a rs895819、rs11671784基因多态性;荧光定量PCR检测胃黏膜miR-27a表达情况。2.病史记录根据设计好的临床病例观察表,认真问诊纳入研究患者病史,根据四诊信息辨证分型并分为各中医证候组,由专人对每例患者病史进行二次核对确认。3.收集及制备标本(1)对符合纳入标准的研究对象行电子胃镜检查,镜下胃黏膜无明显病变者每位于胃窦处近幽门口范围(3cm左右)钳取4块组织,分别为前后壁及大小弯侧。镜下见明显胃黏膜病变者直接钳取病病变边缘组织,同为4块。经确诊为胃癌并就诊于我院胃肠外科行胃癌根治术患者,所取标本来源于术中切除组织,于癌、癌旁、远端各剪取1块组织。(2)上述4块标本分别各进行以下预处理:立即以快速尿素酶法检测Hp感染,、固定及包埋、连续切片以备后续HE染色和美蓝染色,光学显微镜下观察胃黏膜病理改变情况及Hp感染状况;剩余2块立即放置于不同冻存管中后置于低温冰箱(-80℃)中冻存,以待进行基因多态性及miRNA表达检测。结果:1.一般资料本研究临床病例的性别分布无统计学差异,具有可比性。年龄以重度异型增生组及胃癌组最高,且胃癌组与其他各组年龄的差异具有统计学意义(p<0.05)。病程以胃癌组显著高于炎症组,差异有统计学意义(p<0.05)。2.病理改变与Hp感染的关联Hp感染造成了胃黏膜截然不同的病理变化,其Hp感染率在不同病理组别间有明显差异(P<0.05)。炎症程度最轻的炎症组,Hp感染率最低,显著低于胃癌组及重度异型增生组(P<0.05)。Hp感染率最高的是重度异型增生组及萎缩组,并非胃癌组。Hp感染程度在不同病理组别的分布有统计学差异(P<0.05);胃癌组炎症程度并非为最重者,甚至较混合组及重度异型增生组轻。与炎症组相比,萎缩组、混合组、重度异型增生组及胃癌组Hp感染程度较重(P<0.05)。Hp感染程度整体趋势由低到高表现为正常组、炎症组、胃癌组、萎缩组、重度异型增生组。3.Hp感染率及感染程度在不同中医证候的分布情况Hp感染率及感染程度在不同中医证候组别中的分布均有统计学差异(P<0.01);以瘀血内阻证Hp感染率最高、感染程度最重,且瘀血内阻证、脾胃湿热证、肝胃不和证Hp感染率及感染程度均明显高于无证型组(P<0.05)。4.不同中医证候的胃黏膜病变情况各病理组别的中医证候分布有统计学差异(P<0.05)。无证型组在正常组及炎症组中的比例较高(P<0.05),脾气虚证在胃癌组中的比例较高且明显高于炎症组、混合组(P<0.05);肝胃不和证在炎症组中的比例较高且明显高于胃癌组(P<0.05)。5.不同病理组别的基因多态性胃黏膜不同病理阶段的基因型分布无统计学差异,携带TT基因型的个体以及T等位基因的基因频率在相对正常组的比例稍高于其他病理阶段组。CT基因型具有比其他基因型更易进展成为胃癌的趋势,CC纯合基因型个体可能更易发展为萎缩。与正常组相比,各病理组别等位基因的OR值未见统计学差异,但携带C等位基因的患者胃黏膜组织发生癌变的风险是正常组的2.9倍,同时出现萎缩、肠化、异型增生等病变的风险较正常组高出2.7倍,发生单纯萎缩为主的病变风险比正常组高出2倍。相比之下,携带T等位基因的个体胃黏膜发生萎缩、肠化、异型增生、癌变等各种病变的风险则均较低。6.Hp感染及性别因素与基因多态性的关联在Hp阳性组和Hp阴性组中,携带TT基因型的个体均表现出胃黏膜仅发生轻度炎症的趋势,其发生萎缩、肠化、异型增生风险均较低,在Hp阳性组中,携带CT基因型的个体患胃癌的风险有较高的趋势,携带TT基因型及T等位基因的个体可能更易感染Hp,而CC基因型和C等位基因相对不易感染Hp。结合性别因素的影响,正常组男性的TT基因型个体稍高于女性,女性中的CT基因型个体频率高于男性。女性的C等位基因频率高于男性,携带CC基因型的个体,无论是男性还是女性,出现胃黏膜发生萎缩、肠化、异型增生的可能性均相对偏大。7.不同中医证候的基因多态性不同中医证候的rs895819位点基因型分布无统计学差异。就趋势而言,TT纯合基因型及携带T等位基因的个体更易表现为无证型者,CT杂合基因型及携带C等位基因的个体更易表现为瘀血阻滞证,CC纯合基因型更易表现为脾气虚证。无证型组中TT纯合基因型的比例最高,瘀血阻滞证中CT杂合基因型的比例最高,提示CT杂合基因型可能是瘀血阻滞证的易感基因,脾气虚证中CC纯合基因型的比例最高,提示CC纯合基因型可能是脾气虚证的易感基因。T等位基因及C等位基因的基因频率分别在无证型组及脾气虚证中最高,后者可能是胃黏膜病变尤其是癌变的易感基因。8.不同病理组别的miR-27a表达量miR27a在胃癌组中的表达量显著高于重度异型增组(P<0.05),其余各组别间的表达量无明显差异,呈现出炎症组>混合组>正常组>重度组>萎缩组的趋势。进一步针对胃癌组中miR-27a在癌、癌旁、远端不同组织的表达量进行研究,发现其在三者间的表达量无统计学差异,但就趋势而言,癌组织的miR-27a表达量最高,其次为癌旁及远端,由此我们推测,miR27a可能是致癌基因。9.不同中医证候miR-27a表达量的差异本研究miR-27a在各中医证候的整体表达量差异无统计学意义(P>0.05),表达量相对最高的为脾气虚证组,最低的为无证型组,瘀血阻滞证较肝胃不和证及脾胃湿热证表达量低。与无证型组相比,所有证候组的表达量均相对较高,说明miR-27a在一定程度上可影响个体中医证候的变化。10.Hp感染及性别与基因多态性的关联Hp感染者miR27a表达量高于非感染者,但差异无统计学意义(P>0.05)。miR-27a表达在男性患者中显著高于女性患者(P<0.05)。11.miR-27a表达与基因型的关联TT、CT、CC基因型的miR-27a表达量无统计学差异(P>0.05),TT基因型的miR-27a表达量有稍高的趋势。结论:1.Hp是引发胃黏膜病变的关键因素,但是在胃黏膜良恶性病变的后期阶段,Hp可能并非占主导因素。Hp相当于中医学病因学中的“邪气”,会引发机体向各种中医证候进展,不同中医证候的Hp感染率及感染程度以瘀血内阻证最重,脾气虚证在胃癌组中的比例最高。2.miR-27a rs895819位点的突变型CC基因型及C等位基因可能是胃黏膜癌变的风险基因且易发展为脾气虚证者,野生型T等位基因则可能是胃黏膜病变的保护基因且更易形成无证型者。而rs11671784位点的突变可能性较小。3.miR-27a在胃癌组织及脾气虚证患者中呈现高表达趋势,有性别相关性趋势,且可影响机体形成不同中医证候。