【摘 要】
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尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)是存在于多种原核和真核生物细胞中的并参与DNA损伤修复的酶,具有重要的生物学意义.介绍和评价了UDG在分子生物学研究和PCR技术中十分重要的应用价值
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尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)是存在于多种原核和真核生物细胞中的并参与DNA损伤修复的酶,具有重要的生物学意义.介绍和评价了UDG在分子生物学研究和PCR技术中十分重要的应用价值.作为生命科学实验室获取某一目标DNA片段和临床实验室对病原进行检测和监测的重要技术,PCR由于具有操作简便、省时、灵敏度高、特异性强,对原始材料要求低等诸多优点,而日益广泛应用于生物学和非生物学的各个领域.但其强大的扩增能力与检测的敏感性,又极易受到污染而产生假阳性结果.在PCR检测中,应用UDG可彻底清除"残留污染"从而可有效地避免PCR的假阳性结果,保证PCR结果的准确、可信、可靠.这也是PCR技术健康发展和有效使用的关键所在.除此之外,在PCR操作中引入UDG后,不必分离PCR扩增产物,可实现对扩增产物的直接测序.大肠杆菌HB101染色体作为模板,利用人工合成的一对寡核苷酸引物,经PCR扩增了编码尿嘧啶糖基化酶(UDG)基因ung.利用EcoR1和NdeI双酶切重组克隆质粒pGEMUNG,回收带粘性未端的ˉ700bp ung基因片段,通过粘性未端将其与经同样酶切的原核表达质粒pET-5a重组,构建了重组表达质粒pETU-5a,同上转化大肠杆菌JM109(DE3),以IPTG诱导,实现了ung基因的表达,筛选获得了表达菌株.建立了简便、易行、有效的表达产物UDG活性检测方法,并将之用于表达重姐子的筛选.通过表达产物UDG在淋球菌PCR检测过程中清除"残留污染"的应用,充分显示了UDG在保证PCR结果可靠性方面的重要性.为最终PCR防"残留污染试剂盒"的开发提供了菌种和技术支持.
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