背景与目的：外科临床至今没有防治术后腹腔粘连统一而广泛应用的好办法,预防腹腔粘连药物的优化及机理研究一直是外科临床及基础研究的重点和热点之一。中医药在防治术后腹腔粘连方面具有多环节多靶点发挥作用、毒副作用小且价格低廉的优势,这其中川芎嗪脱颖而出,受到学者们的关注。导师及其研究团队长期以来一直致力于中医药防治术后腹腔粘连的研究工作,对川芎嗪防治术后腹腔粘连也进行了专项研究,在完成了川芎嗪纳米喷雾剂的制备并建立了质量监控体系后,证实了川芎嗪纳米喷雾剂具有抑制腹腔粘连模型腹腔液中粘连相关因子TGF-β1、FN、CTGF的升高和调节纤溶系统t-PA、PAI平衡的作用。结合腹膜间皮细胞在腹腔粘连形成过程中的重要作用及TGF-β这一粘连形成机制中关键的靶点,我们开展本项研究,旨在进一步明确川芎嗪纳米喷雾剂药效的同时研究其影响腹膜间皮细胞结构和功能的机制,及在TGF-β致组织粘连过程中川芎嗪纳米喷雾剂如何调控TGF-β/Smad信号途径及下游靶基因的表达,从而深入川芎嗪纳米喷雾剂防治腹腔粘连的作用机理研究。川芎嗪纳米喷雾剂防治大鼠实验性腹腔粘连药效学研究部分：方法：1、锉刀法建立大鼠实验性腹腔粘连模型。SD大鼠120只,随机分成4组,每组30只。A组空白组：造模后不使用任何药物,直接关腹；B组川芎嗪原料组：关腹前创面涂抹川芎嗪原料溶液,5 ml/kg; C组川芎嗪纳米喷雾剂组,关腹前创面喷涂川芎嗪纳米喷雾剂,5 ml/kg; D组透明质酸钠组：关腹前创面涂抹1%透明质酸钠凝胶,0.5ml/kg。2、各组分别于术后1、3、5、7、14d随机抽取6只大鼠,处死开腹,根据Phillips五分级标准、观察盲肠受损处粘连情况,分别评分记录。取盲肠受损创面组织进行病理检测和透射电镜检测,对腹腔粘连形成过程及川芎嗪纳米喷雾剂对不同阶段干预后盲肠受损创面的病理形态及超微结构进行观察。结果：1、从整体层次,能降低大鼠腹腔粘连的发生率,降低粘连的分级评分；2、从病理形态学层次,能明显抑制盲肠受损创面组织成纤维细胞和结缔组织增生；3、从超微结构层次,能改善盲肠受损创面组织间皮细胞受损后结构的破坏,抑制成纤维细胞的转变。结论：川芎嗪纳米喷雾剂具有确切的防治大鼠实验性腹腔粘连的效果。川芎嗪纳米喷雾剂保护大鼠腹膜间皮细胞的实验研究部分：方法：1、胰酶消化法体外培养出大鼠腹膜间皮细胞(RPMCs),免疫组化进行鉴定；2、MTT法测定川芎嗪纳米喷雾剂对正常RPMCs和经Tnf-α诱导的RPMCs活性的影响；结果：1、分离培养的细胞经鉴定为RPMCs; 2、川芎嗪纳米制剂对正常RPMCs的活性没有影响,经Tnf-a诱导的RPMCs活性显著性下降,而川芎嗪纳米制剂能够抑制经Tnf-a诱导的RPMCs活性下降,对RPMCs有一定的保护作用：结论：川芎嗪纳米制剂通过抑制受损RPMCs的活性下降而保护RPMCs。川芎嗪纳米喷雾剂调控大鼠腹膜间皮细胞TGF-β/Smad信号途径的实验研究部分：方法：1、体外培养大鼠腹膜间皮细胞并鉴定；2、经Tnf-α诱导RPMCs,激活TGF-β/Smad信号途径,RT-PCR检测川芎嗪纳米制剂干预下TGF-β1mRNA、Smad7mRNA的表达；3、川芎嗪纳米制剂干预下细胞内p-Smad2/3的定位和蛋白表达免疫组化分析；4、川芎嗪纳米制剂干预下细胞内TGF-β1、Smad7、FN、CTGF、PAI-1、和COL1的Western blot蛋白分析；结果：1、分离培养的细胞经鉴定为RPMCs;2、经Tnf-α诱导的RPMCs的TGF-β1mRNA表达明显上调、Smad7mRNA表达明显受到抑制,而川芎嗪纳米制剂能抑制TGF-β1mRNA的表达、上调Smad7mRNA的表达；3、经Tnf-α诱导的RPMCs的p-Smad2/3被激活转核内聚,表达水平明显上调,而川芎嗪纳米制剂能抑制p-Smad2/3的转位及表达水平；4、经Tnf-α诱导的RPMCs的TGF-β1、FN、CTGF、COL1和PAI-1蛋白含量升高,Smad7的蛋白含量减少；川芎嗪纳米制剂能降低TGF-β1、FN、CTGF、COL1和PAI-1的蛋白含量,提高Smad7的蛋白含量；结论：川芎嗪纳米制剂能抑制TGF-β/Smad信号途径的激活,进一步抑制其下游靶基因的表达,从而抑制腹膜纤维化,起到抗腹腔粘连的作用。总结：研究从整体到局部再到微观三个层次明确了川芎嗪纳米喷雾剂防治大鼠实验性腹腔粘连的效果,证实了川芎嗪纳米喷雾剂对大鼠腹膜间皮细胞受损时结构和活性的保护作用,并明确了川芎嗪纳米喷雾剂通过抑制TGF-β1的表达,进而抑制5mad2/3核内聚和磷酸化水平,同时上调Smad7的表达,起到抑制TGF-β/Smad信号途径的作用,进一步抑制其下游靶基因FN、CTGF、COL1和PAI-1的表达,从而抑制细胞外基质的生成和积聚及胶原的合成和堆积,最终防止腹膜纤维化,发挥防治腹腔粘连的作用。本研究获得了川芎嗪纳米喷雾剂致术后纤维化改变的功能依据,并结合下游靶基因激动／抑制情况,分析了其与Smad信号通路的关系及影响的可能机制,为川芎嗪纳米喷雾剂调控腹膜间皮细胞TGF-β/Smad信号通路抗腹腔粘连的机制提供了新的靶标。