膀胱癌是外科常见恶性肿瘤，发病率目前居我国泌尿外科恶性肿瘤的首位。在膀胱癌中，90％以上是膀胱移行细胞癌(BTCC)，超过70％的BTCC在治疗后可能复发，复发肿瘤中30％出现恶性度增加，严重威胁人类健康。膀胱移行细胞癌的治疗措施首选手术，作膀胱癌电切、膀胱部分切除等保留膀胱手术的患者，术后需要作定期膀胱腔内灌注化疗和膀胱镜复查，术后化学预防对降低BTCC复发率极其重要，目前常用药物有卡介苗、丝裂霉素、阿霉素、羟基喜树碱、细胞因子等。浸润性BTCC或浅表性BTCC术后复发患者都需全身化疗，绝大多数膀胱癌患者的全身化学治疗毒副作用明显，可引起心、肝、肾功能障碍或骨髓抑制及消化道症状。目前膀胱癌对放射治疗仍不十分敏感，临床上较少应用。维甲酸能在体内、外调节正常和恶性上皮细胞的生长和分化，维甲酸和它的类似物已在动物模型和临床试验中用于人类恶性肿瘤癌的预防和治疗。 为寻找长期有效膀胱癌化学预防、全身治疗或放疗增敏药物的目的，我们应用细胞培养技术、分子生物学手段及动物试验等一系列实验，观察了维甲酸衍生物4HPR(4-羟苯维胺酯)、盐酸阿霉素或两者同时及先后联用，对人膀胱癌细胞株T24的生长抑制及诱导凋亡作用；应用N-甲基亚硝基脲作膀胱灌注成功建立了Wistar大南京医科人学博l学位论文鼠膀就癌动物模型，动态观察膀就粘膜形态学改变，并比较了4HPR、盐酸阿霉素或两者联用对大鼠膀耽癌形成及病理改变的影响;比较单独或联合应用全反式或9顺式维甲酸和干扰素a一Za对四种人膀耽癌细胞株生长抑制及促进凋亡作用的结果，并研究其可能的分子机制。一、盆酸阿霉素联合4HPR对人膀脱移行癌T24细胞株的生长抑制和诱导凋亡作用: 应用四甲基偶氮蓝比色法(MTT)检测0.05mg/L阿霉素及10一6、5、10一6、10一smol/L等不同浓度4一HPR对人膀胧癌细胞株T24的细胞毒生长抑制作用，应用流式细胞仪检测4一HPR、阿霉素或两药联合应用时对T24细胞的凋亡诱导作用和细胞周期变化。结果显示MTT法测得阿霉素的24小时半数抑瘤浓度为0.smg/L，24、48和72小时4一 HpR半数抑瘤浓度分别为3 X 10一，M、2 x 10一，M、1 0 x 10一6M:药物作用6d时，5“mol/L的4一HPR、0.05mg/L阿霉素诱导T24细胞作用6天后凋亡率分别为5%和22%，两药联合后凋亡率达63%(P<0.05)o0.smg/L阿霉素对T24细胞作用后凋亡率为21.3%，预作用3小时后，联合5林mol/L的4一HPR凋亡率上升99%(P<0.05)。4一HPR诱导T24细胞凋亡存在着浓度和时间依赖性，4一HPR与阿霉素联合应用对膀胧癌细胞有明显生长抑制和凋亡诱导的协同作用，能缩短产生抑瘤效果的作用时间，减少阿霉素的用量。二、N一甲基亚硝墓服(袱U)诱导建立，i 5 tar大鼠肪脱癌动物模型，4一BPR肪脱内灌注预防大鼠肪脱癌的实验研究: 将136只雌性wistar大鼠，随机分成9组，用MNU作为诱癌剂，膀耽内灌注Zmg/次，1次/2周，共4次;分别观察实验第3、6、9、12和14周时膀就钻膜的改变、并作尿叮咤橙(A0)荧光染色，发现南京医科人学博卜学位沦文膀耽灌注3周出现不典型增生或腺性膀耽炎，6周时有原位癌改变，9周时膀胧可观察到癌性肿块，12一14周时出现膀耽乳头状癌，9周时的致癌率100%，组织学改变及病理学特征与人膀胧癌十分相似。AO染色诊断大鼠膀就癌的阳性”.3%，MNU灌注诱导大鼠膀胧癌方法简便、可靠，致癌过程经历上皮增生、乳头状瘤形成和癌变的系列动态变化过程。用4一HPR、ADM作为化学防癌剂或治疗剂，在不同时期行膀胧内灌注，观察各组膀耽癌发生情况，实验周期为14周，发现4一HPR或MDA能明显降低大鼠膀耽癌发生率。4一HPR膀脱内灌注用于预防膀就癌，安全有效;前者和4一HPR口服相比，所用剂量明显减少，性价比更高，有临床应用前景。三、联合应用维甲酸和干扰素a一2a对脸耽癌细胞的生长抑制和凋亡诱导作用: 应用全反式维甲酸(ATRA)和9一顺式维甲酸(gcRA)联合干扰素a一Za(IFNa一Za)作用于4组人膀胧癌细胞株，运用TUNEL、FCM、RT一PCR及western blot等技术观察维甲酸、干扰素单独或联合应用对不同膀耽癌细胞株的生长抑制、诱导凋亡的影响以及核维甲酸类受体、Statl蛋白等方面的改变。发现ATRA和 gcRA对所有膀胧癌细胞的抑制生长和诱导凋亡作用均不明显，而IFNa一a能增强ATRA和gcRA对膀胧癌的这种作用，且联合应用ATRA和IFNa一2a能诱导膀耽癌细胞RAR日和Statl的表达。我们认为工FNa一2a能协同ATRA和gcRA对膀胧癌细胞生长抑制和凋亡诱导效应，上调Statl基因表达可能是其主要分子机制，实验显示了维甲酸和干扰素联合应用治疗膀胧移行细胞癌的协同作用。